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背景:肝脏是人体最大的器官,也是消化系统最大的腺体,参与人体的蛋白合成、储存糖原、解毒等重要功能。急性肝损伤发病率与日俱增,严重危害患者健康。临床上常见病毒、外伤、化学物质如四氯化碳(CCL4)容易诱导肝损伤。大量研究显示,线粒体功能障碍及其介导的过度氧化应激、炎症参与了肝损伤的发生。鱼藤酮被称为线粒体复合物-1抑制剂,它可以部分抑制线粒体呼吸链。在疾病状态下,异常的线粒体可以释放细胞毒性产物活性氧(ROS)和促凋亡因子,导致器官损伤。因此,我们推测鱼藤酮治疗可能通过抑制受损线粒体的活性来改善器官损伤。与此观点一致,有相关研究表明鱼藤酮在病理状态下具有抗氧化活性,鱼藤酮可以减轻慢性肾病的炎症和氧化应激,也可减轻骨关节炎的炎症反应。但是鱼藤酮对急性肝脏损伤具体保护作用、机制尚未明确。目的:探讨鱼藤酮在四氯化碳所致急性肝损伤中的保护作用及机制,为临床急性肝损伤治疗提供依据、参考。方法:选择C57BL/6小鼠24只作为对象,8-10周龄,体重20-24g,雄性。随机选取小鼠8只,设为对照组。剩余16只C57BL/6小鼠,均采用CCL4诱导的急性肝损伤,构建动物模型,建模成功后随机分为CCL4模型组(n=8只)及鱼藤酮组(n=8只)。对照组和CCL4模型组小鼠均接受正常的果冻饮食干预,鱼藤酮组在正常饮食基础上给予250ppm鱼藤酮(约40mg/kg/天),连续进行3d干预。采用血清生化自动分析仪测定三组血浆丙氨酸氨基转移酶(ALT)和血浆天冬氨酸氨基转移酶(AST)的水平;采用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定肝脏白介素-6(IL-6)和4-羟基壬烯醛(4-HNE)水平;3d干预后处死小鼠,取肝脏组织,并完成HE染色、免疫组化染色;采用蛋白印迹法完成三组氧化应激水平:超氧化物歧化酶2(SOD2)、丙二醛(MDA),线粒体损伤:线粒体转录因子(TFAM)、线粒体NADH脱氢酶1(ND1)、细胞色素(cytb)测定;采用实时荧光PCR技术测定三组炎症因子mRNA水平。本研究中所有数据均采用SPSS18.0软件处理。结果:(1)CCL4模型组小鼠ALT、AST水平,显著高于对照组(P<0.01);鱼藤酮组小鼠ALT、AST水平,明显低于CCL4模型组(P<0.05);(2)肝脏组织大体形态及HE染色结果表明:CCL4处理显示大体肝脏形态明显改变,表现为散在的白色颗粒,灰色,脆性质和肝脏体积增大,鱼藤酮显著缓解这些改变。四氯化碳造成肝脏中的广泛细胞坏死,其在鱼藤酮治疗后大部分正常;肝脏组织病理学评分结果表明:四氯化碳组肝脏病理学评分高于对照组(P<0.001);鱼藤酮组小鼠肝脏组织评分,低于四氯化碳组(P<0.01);(3)CCL4处理后能降低TFAM,mtND1和Cytb的基因表达水平,而经鱼藤酮干预后能恢复TFAM,mtND1和Cytb表达水平;通过蛋白质印迹在蛋白质水平证实了 TFAM的变化是一致的;同时,实验中检测线粒体复合物-1的活性,结果显示,与CCL4组相比,鱼藤酮处理组的肝线粒体复合物-1活性被显著抑制;(4)Western印迹测量SOD2表达,并观察到CCL4组该抗氧化酶的显著减少。在经鱼藤酮处理的动物中,肝脏中SOD2的这种减少完全恢复。与SOD2恢复一致,在鱼藤酮处理的小鼠的肝组织中MDA和4-HNE的增加被显著阻断。通过DHE探针检测进一步证实了鱼藤酮在该实验环境中的抗氧化作用;(5)炎症基因通过CCL4处理上调,其被鱼藤酮疗法抑制。此外通过ELISA和免疫组织化学测量了肝脏中的IL-6蛋白质水平,发现增强的IL-6蛋白质在很大程度上正常化;(6)单独的鱼藤酮处理并不会对体重产生影响,对肝脏重量、ALT及AST水平影响亦较少;且250ppm剂量的鱼藤酮干预后肝脏形态变化影响亦较小;实验中检测了仅给予鱼藤酮的小鼠肝脏中TFAM、mtND1基因的表达水平,结果显示鱼藤酮并不会影响TFAM的蛋白质水平和mtND1的mRNA水平;采用qRT-PCR和Western印迹分析细胞色素P450酶2E1(CYP2E1),即CCL4的代谢酶的表达水平,结果显示:单独用鱼藤酮处理不会显著影响CYP2E1的表达。结论:鱼藤酮作为线粒体复合物-1抑制剂在四氯化碳所致急性肝损伤小鼠中能减轻肝脏损伤,能改善小鼠肝功能水平,其机制可能为通过抑制机体内的过度的氧化应激水平和降低炎症因子水平。从而能为急性肝损伤治疗提供新思路。