“黄芩-大黄”配伍见于三黄类方（泻心汤及其衍生制剂一清片、一清胶囊、一清颗粒及三黄片等）、牛黄解毒片、导赤丸等成方制剂。大黄能提高黄芩清热泻火的作用,属于配伍七情中的相使入药。体外和体内试验证明大黄、黄芩对多种炎症具有调节作用,但是两者配伍使用的抗炎机制却尚未阐明。本文以脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）诱导小鼠巨噬细胞系RAW264.7建立体外炎症模型,探究“黄芩-大黄”配伍的抗炎作用及其相关机制,为治疗畜禽炎症性疾病药物的研发提供理论依据。采用CCK8法检测细胞活力,确定黄芩-大黄合剂作用于RAW264.7细胞的安全浓度,采用ELISA与RT-q PCR检测黄芩-大黄合剂对LPS诱导RAW264.7细胞中IL-6、IL-1β、TNF-α的蛋白与基因表达水平,采用Western blot、RT-q PCR、Griess法分别检测黄芩-大黄合剂对细胞中i NOS蛋白与m RNA表达及细胞上清液中NO释放的影响。结果9.375 mg/m L及其以上浓度的黄芩-大黄合剂3 h、6 h、12 h显著降低了细胞活力,为了细胞的安全,选用1000、500、250μg/m L作为后续试验浓度。与空白组比较,LPS刺激RAW264.7巨噬细胞释放了大量的IL-6、IL-1β、TNF-α以及NO,并且显著的促进了i NOS的合成,表明LPS诱导RAW264.7细胞的炎症模型建立成功,而黄芩-大黄合剂能够抑制LPS诱导的RAW264.7细胞中IL-6、IL-1β、TNF-α炎性因子的分泌及基因表达并且能够抑制LPS诱导的RAW264.7细胞中i NOS的表达以及NO的产生,表明黄芩-大黄合剂对LPS诱导RAW264.7细胞的炎症反应有明显的保护作用。为进一步探究其作用机制,通过Western blot检测黄芩-大黄合剂对LPS诱导的RAW264.7细胞NF-κB通路中的TLR4、p-IκB-α和p-P65,MAPK通路中磷酸化蛋白p-P38、p-JNK、p-ERK以及JAK-STAT通路中的p-STAT1、pSTAT3蛋白表达的影响,通过细胞免疫荧光检测黄芩-大黄合剂对LPS诱导RAW264.7细胞NF-κB p65蛋白核易位的影响,并且用黄芩-大黄合剂和NF-κB抑制剂JSH-23预处理细胞,检测NF-κB在LPS诱导RAW264.7细胞炎症反应中的作用。结果黄芩-大黄合剂能够抑制TLR4蛋白的表达,升高IκB-α和p65总蛋白的表达,抑制磷酸化蛋白p-IκB-α、p-P65、p-P38、p-JNK、p-ERK、p-STAT1以及p-STAT3的表达并且能够显著抑制NF-κB P65的核易位情况。同时,作为阳性对照,NF-κB抑制剂JSH-23处理后,p-P65表达水平及IL-6、IL-1β、TNF-α的含量显著下调。综上所述,黄芩-大黄合剂可通过抑制NF-κB、MAPK和STAT通路的活化降低炎症相关因子的表达发挥抗炎的效果,提示黄芩-大黄配伍是一个具有抗炎作用的潜在治疗药物。