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目的掌握自体脂肪间充质干细胞(ADSCs)的提取以及培养方法,观察干扰素γ(IFN-γ)增强成人自体ADSCs对外周血淋巴细胞免疫调节作用及机制。方法本研究方法为收集健康人体的ADSCs,将ADSCs进行培养至第3代,观察细胞形态,对细胞表面分化抗原进行流式细胞鉴定,同时对细胞进行成脂以及成骨细胞分化实验,对ADSCs进行鉴定。收集分离外周血单个核细胞(PBMCs),与ADSCs建立共培养体系共培养5d,在共培养体系中加入植物血凝素(PHA)和白细胞介素(IL-)2来活化T细胞。本研究共分三组,一组为IFN-γ诱导ADSCs的IFN-γ刺激组,一组为没有IFN-γ诱导的未刺激组,一组为IFN-γ诱导ADSCs后又加入1-甲基色氨酸(1-MT)的IDO阻断组。对照组单纯采用PHA和IL-2刺激T细胞。每组与PBMCs按一定的比例共培养,采用MTT法检测T细胞增殖吸光度值,进而计算出T细胞增殖抑制率。使用流式细胞术检测出活化T细胞CD4+CD25+Treg比例。检测IFN-γ对IDO基因以及蛋白水平的变化。结果ADSCs传3代后形态为典型的纺锤形,贴壁生长;分离的自体ADSCs高表达分化群(CD)73、CD90、CD105阳性率均>95%,低表达造血干细胞表面标志CD34、CD45,流式细胞术鉴定表面标志物符合国际标准;ADSCs具有分化为成脂和成骨细胞的能力。ADSCs与淋巴细胞比例为1:50时,增殖抑制率为(20.25±3.10)%,比例为1:10时增殖抑制率为(52.75±4.85)%,比例为1:5时增殖抑制率为(65.75±5.12)%,T细胞的增值抑制率和细胞比例呈剂量依赖关系,IFN-γ预刺激组ADSCs与淋巴细胞比例为1:50时,增殖抑制率为(48.00±5.35)%,比例为1:10时增殖抑制率为(70.75±4.19)%,比例为1:5时增殖抑制率为(79.50±6.19)%,T细胞的增值抑制率和细胞比例呈剂量依赖关系,并高于未刺激组;IFN-γ预刺激组CD4~+CD25~+Treg比例为(22.05±2.43)%与未刺激组相比显著升高;IFN-γ预刺激组ADSCs内IDO mRNA表达水平显著高于未刺激组;IFN-γ预刺激组ADSCs内IDO蛋白表达水平显著高于未刺激组;IDO阻断组对活化T细胞增殖抑制率较IFN-γ预刺激组显著降低(P<0.01)。结论随ADSCs与T细胞共培养比例增大,ADSCs对活化T细胞增殖的抑制率显著提高,呈剂量依赖关系。进一步利用IFN-γ预处理ADSCs,结果发现IFN-γ刺激显著增强ADSCs负性调节作用。利用IFN-γ预处理ADSCs后ADSCs诱导活化T细胞向CD4~+CD25~+Treg亚群转化的能力增强。PCR实验发现IDO mRNA表达受IFN-γ影响,IFN-γ能促进IDO mRNA表达。在蛋白质水平上,IFN-γ也能促进IDO蛋白表达。使用1-MT后能很大程度上抑制ADSCs介导的免疫抑制。总而言之,IFN-γ促进ADSCs对活化T细胞免疫抑制能力,IDO在ADSCs介导的免疫抑制中起重要免疫调节作用。