梭柄松苞菇多糖结构分析及其抗肿瘤活性研究

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梭柄松苞菇(Catathelasma ventricosum (Peck) Sing),属真菌界、伞菌目、白蘑科、松苞菇属,又名老人头菌,具有较高的营养价值和药用疗效。梭柄松苞菇多糖具有较好的降血脂、降血糖、降血压、抗氧化等活性,但对于其多糖的分离纯化、结构鉴定及其它生物活性的系统研究甚少,本课题系统开展了梭柄松苞菇子实体多糖的提取、分离、纯化及其结构鉴定,并研究了其抗肿瘤活性。主要研究结果如下:梭柄松苞菇子实体中粗蛋白、总糖、粗纤维、粗脂肪、灰分、水分、还原糖含量分别为:17.21%、52.48%、4.57%、1.77%、7.73%、10.61%、11.15%;其中Mg、Mn、Fe、Zn等矿质元素的含量分别为626.35、11.24、523.25、92.40mg/kg;氨基酸总量为17395.61mg/100g。探究了超声辅助水提梭柄松苞菇子实体多糖,优化了提取工艺。通过单因素及正交实验确定了梭柄松苞菇多糖的超声辅助提取工艺的最佳提取条件为:超声功率70W,超声时间10min,浸提温度60℃,水料比为20:1,此条件下多糖得率为12.380%,且得到多糖得率的影响因素顺序依次为:超声时间>浸提温度>水料比>超声功率。最佳提取条件下得到的梭柄松苞菇多糖,再经一系列纯化步骤得到梭柄松苞菇粗多糖CVP,得率为1.3119%,呈淡黄色。再经DEAE-52柱层析及葡聚糖凝胶Sephadex G-100柱层析,得到五个组分CVP-Ⅰ、CVP-Ⅱ1、CVP-Ⅱ2、CVP-Ⅲ1、CVP-Ⅲ2,GPC及葡聚糖凝胶Sephadex G-100柱层析鉴定CVP-Ⅰ、CVP-Ⅱ2、CVP-Ⅲ1、CVP-Ⅲ2四个样品为单一组分,重均相对分子质量分别为14331Da、11252Da、39359Da、13999Da。对CVP-Ⅰ、CVP-Ⅱ2、CVP-Ⅲ1、CVP-Ⅲ2四种纯化组分进行理化性质分析,发现四种纯化多糖均不含淀粉,其状态及颜色依次为:白色粉末状、白色棉絮状、白色棉絮状、淡黄色棉絮状;总糖含量依次为:80.87%、86.76%、89.38%、85.78%;糖醛酸含量依次为10.94%、12.93%、13.68%、13.10%;蛋白含量依次为:1.80%、0、0.51%、1.79%。梭柄松苞菇多糖初级结构分析:(1)红外光谱图显示:CVP-Ⅰ、CVP-Ⅱ2、CVP-Ⅲ1、CVP-Ⅲ2在区间3428~3394cm-1有O-H伸缩振动,在区间2929~2923cm-1存在C-H伸缩振动,在区间1430~1200cm-1存在羧基伸缩振动,可以判断4种样品均为多糖;在波长1645cm-1附近的明显吸收峰及在1200~1000cm-1区间吸收峰印证了四种纯化糖均为吡喃型的酸性杂多糖;CVP-Ⅰ在767cm-1和872cm-1的特征吸收峰,表示存在甘露糖苷。(2)单糖组成分析结果显示:CVP-Ⅰ、CVP-Ⅱ2中均含有甘露糖、岩藻糖、葡萄糖、半乳糖,CVP-Ⅰ中该四种单糖摩尔比依次为:1:10.66:10.33:34.26,CVP-Ⅱ2中该四种单糖摩尔比依次为1:1.48:29.36:5.02;CVP-Ⅲ1含有甘露糖、葡萄糖,单糖摩尔比大致为:甘露糖:葡萄糖=1:41.27;CVP-Ⅲ2含有甘露糖、葡萄糖和半乳糖,且其单糖摩尔比大致为:甘露糖:葡萄糖:半乳糖=1:30.23:2.59。(3)高碘酸氧化和Smith降解结果显示CVP-Ⅰ中含有(1→)、(1→6)糖苷键,比例为多糖连接键58.20%,(1→2)、(1→2,6)所占的比例为多糖连接键的9.03%;不被氧化的(1→3)、(1→2,3)、(1→3,6)、(1→2,4)、(1→2,3,4)糖苷键所占的比例为32.33%。(4)核磁共振结果显示CVP-Ⅰ中含有、β两种糖苷键构型,有4种重复单元组成的杂多糖,其中主链应为(1→6)糖苷键。利用MTT法探索梭柄松苞菇五种纯化多糖CVP-Ⅰ、CVP-Ⅱ1、CVP-Ⅱ2、CVP-Ⅲ1、CVP-Ⅲ2在体外对人体乳腺癌细胞MCF-7和人体肝癌BEL-7402细胞增殖的抑制作用,结果发现该五种多糖对两种癌细胞均有明显的抑制作用,呈现一定的时间和浓度依赖关系,且CVP-Ⅲ1、CVP-Ⅲ2对两种细胞的抑制效果均较好。
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