论文部分内容阅读
实验目的:缺血性脑卒中是危害人类健康的主要疾病之一,具有高致残致死率、高复发率,预防用药的策略非常重要。阿托伐他汀作为缺血性脑卒中预防用药其神经保护作用的实验室依据不完善,本课题拟用不同剂量以及不同时程的阿托伐他汀预处理和永久性大脑中动脉梗死的大鼠模型,观测阿托伐他汀预处理在缺血性脑卒中急性期治疗中的神经保护作用及可能的机制,探讨他汀类药物预防缺血性脑卒中的应用策略。实验方法:1、采用高(8.4mg/kg·d-1)、低(2.1mg/kg·d-1)两种不同剂量的阿托伐他汀以及长（28天）、短（7天）两种用药时程预处理SD大鼠,留取用药前后的血清,栓塞一侧大脑中动脉建立急性缺血性脑卒中SD大鼠模型。2、观察各组大鼠急性缺血性脑卒中后24h死亡率,测定存活大鼠的神经功能评分,用TTC法检测大鼠脑体积比例。3、用免疫组化、PCR及Western blots等方法检测大鼠脑内炎症相关因子TLR4和NF-κB,梗死周边区域血管内皮生长因子（VEGF）和凋亡相关因子caspase-3的表达,用TUNEL法观测梗死周边区域神经细胞的凋亡。4、用ELISA法检测血清中VEGF、Ang-1以及Ang-2水平,梗死后脑内IL-10、IL-17的表达水平。5、用宏基因组微生物分类测序法检测各组SD大鼠肠道菌群。实验结果:第一部分:1.阿托伐他汀预处理降低pMCAO模型SD大鼠24h死亡率,高剂量预处理死亡率降低更明显同时还改善神经功能评分。2.与同等剂量长期阿托伐他汀预处理组相比,短期预处理组梗死比例减小。第二部分:1.阿托伐他汀短期预处理明显增加SD大鼠血清VEGF水平,低剂量预处理增加VEGF水平更明显。2.短期低剂量阿托伐他汀预处理增加SD大鼠血清Ang-1水平。3.阿托伐他汀短期预处理,高剂量增加SD大鼠血清Ang-2水平,而低剂量降低SD大鼠血清Ang-2水平。第三部分:1.高剂量阿托伐他汀预处理降低pMCAO模型大鼠24h脑内TLR4以及NF-κB的表达。2.短期阿托伐他汀预处理增加pMCAO模型大鼠梗死周边区域VEGF的表达,低剂量预处理这种增加更明显。3.pMCAO后24h,经阿托伐他汀预处理的SD大鼠梗死周边区域caspase-3表达降低及TUNEL染色细胞凋亡率减少,且短期组的这种减少较长期组更明显。第四部分:1.阿托伐他汀预处理降低pMCAO模型大鼠24h脑内IL-17水平;2.长、短期高剂量和长期低剂量阿托伐他汀预处理均增加pMCAO模型大鼠24h脑内IL-10水平;3.阿托伐他汀预处理改变SD大鼠肠道菌群构成,长、短期高剂量组和长期低剂量组肠道菌群构成中,梭菌的丰度比例增加。实验结论:1.阿托伐他汀预处理剂量依赖地降低pMCAO模型大鼠24h死亡率,其机制可能与阿托伐他汀抑制脑内TLR4和NF-κB的表达相关。2.正常SD大鼠,短期给予高剂量阿托伐他汀,可能利于启动血管新生;短期给予低剂量阿托伐他汀,可能利于维持血管稳定性。3.阿托伐他汀预处理短期优于长期,其机制可能与短期阿托伐他汀预处理增加血清及脑组织内VEGF的表达,减少梗死周边区域caspase-3的表达及神经细胞凋亡相关。4.阿托伐他汀预处理降低pMCAO模型大鼠早期脑内的炎症反应,可能与阿托伐他汀对肠道菌群的影响相关。