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黑鲷(Acanthopagrus schlegeli)属鲈形目、鲷科、鲷属,因其适应性强、生长迅速、营养价值高等特点,受到许多消费者喜爱,具有广阔的市场前景。海水网箱养殖和海水池塘养殖是主要且常见的两种黑鲷养殖方式。近年来,随着养殖种类增加、养殖密度不断提高及海水中的病原体数量不断增加,导致养殖环境恶化,细菌、病毒、寄生虫性疾病爆发。严重影响养殖的经济效益,阻碍了黑鲷养殖业的健康发展,同时,给黑鲷的养殖和生产带来巨大的经济损失。目前人们对黑鲷免疫方面的认识较少,随着产业发展,人们逐渐意识到防病重于治病,通过提高机体的免疫力从而起到预防疫病发生的作用。同时,鱼体自身免疫强的提高对于在水产养殖业中减少病害防治药物使用量、提高养殖产品质量、确保水产养殖行业健康发展等各方面都有着十分重要的作用。本研究针对黑鲷免疫基因Myd88和IκBα开展研究,主要包括以下几方面:1.黑鲷Myd88、IκBα基因克隆及生物信息学分析黑鲷Myd88的ORF为897 bp,编码299个氨基酸,蛋白分子量为34.30 k Da,等电点为5.14。黑鲷IκBα的ORF为948 bp,编码316个氨基酸,蛋白分子量为35.75 k Da,等电点为4.67。黑鲷Myd88与斑马鱼同源性最高,为68.88%,与人1型Myd88、2型Myd88和鼠Myd88的同源性分别为59.58%、61.29%和62.01%,与果蝇Myd88的同源性较低,为28.38%。黑鲷IκBα与斑马鱼IκBα相似性最高为53.54%,与小鼠和人IκBα的同源性分别为48.52%和49.19%,与果蝇IκBα同源性较低,为32.02%。2.黑鲷Myd88和IκBα基因的组织分布和诱导表达模式分析Myd88和IκBα基因在健康黑鲷个体的各个组织均有表达,Myd88在血液中表达较高,在肌肉组织和脑中表达较低;IκBα也是在血液中表达较高,而在肌肉组织和肠表达较低。副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus)感染黑鲷后,Myd88和IκBα基因在心脏、肝脏、肾脏、血液中的表达量显著变化,Myd88基因表达呈现上调的的趋势,而IκBα基因表达呈现下调的的趋势,由此可知这两个基因在机体抵抗病原入侵起到至关重要的作用。3.Myd88和IκBα过表达引起下游炎性因子表达量的变化对黑鲷Myd88和IκBα基因分别构建了哺乳动物过表达载体,并转入仓鼠卵巢细胞(CHO)中,检测IL-1β、IL-6、IL-12、IL-18的表达。结果发现Myd88和IκBα过表达后引起下游炎症因子不同程度表达变化,Myd88促进炎症因子的表达,而IκBα抑制炎症因子的表达。由此可以得出Myd88和IκBα作为两个关键的基因,可起到调控下游炎症因子表达的作用,通过调节炎症因子表达的方式调节机体免疫能力。