论文部分内容阅读
植物-微生物联合修复土壤重金属污染是目前全球研究热点之一。植物内生菌因定殖在植物内部,与宿主植物之间的互作更为直接,因此在促进宿主植物生长、增强抗逆性和提高植物-微生物联合修复效率方面具有一定优势。本研究通过对重金属污染环境中土荆芥(Dysphania ambrosioide)内生真菌多样性及其重金属抗性的研究,拟筛选出能提高宿主重金属修复效率的菌株,并对其生态学功能机制进行研究,为植物-微生物联合修复土壤重金属污染打下基础。在本研究中,我们利用纯培养技术,从来源于两个样地(矿渣堆和废弃地)共368个土荆芥组织块中共分离得到内生真菌237株,经鉴定它们分属于43个分类单元。两个样地土荆芥内生真菌的多样性指数(H’)分别为2.92和2.82,差异不显著。然而,两个样地土荆芥内生真菌的定殖率却存在显著差异(P<0.05,卡方检验),其中来源于矿渣堆的土荆芥其内生真菌定殖率为35.20%,而来源于废弃地土荆芥内生真菌的定殖率却为57.67%。此外,来源于两个样地土荆芥的优势内生真菌种属也各不相同:矿渣堆土荆芥优势内生真菌为Plectosphaerella sp.、Cladosporiu.2和Verticilli m sp.,它们的相对分离频率分别为 18.07%、10.84%和8.43%,而来源于废弃地土荆芥的优势内生真菌却为Phoma sp.、Peyronellaeasp.和Alternaria sp.,它们的相对分离频率分别为20.13%、12.34%和11.69%。两个样地相距仅2公里,大环境相似,但两个样地的同种植物其内生真菌的定殖率及优势内生真菌类群却存在显著差异,我们认为这可能源于两个样地土壤重金属含量、水分含量等差异所致:矿渣堆土壤中重金属含量较高、水分含量低,因而土壤中微生物数量较少,从而导致定殖于植物的内生真菌数量较少。菌株的重金属耐受研究表明,50%的测试菌株表现出重金属耐受性。表现较为突出的3个菌株中,FT2G59为Penicillium sp,它可以同时耐受Pb、Zn、Cd 3种重金属,且Pb、Zn、Cd的最小抑制浓度分别是30-50mmol/L,>680mmol/L,20-30 mmol/L,优于已经报道的青霉属菌株;而菌株FT2G1和FT2G7均为Phomopsis columnaris,它们仅对Cd表现出较好的耐受性,最小抑制浓度都是30-50 mmol/L。免培养高通量测序研究结果表明,来源于矿渣堆和废弃地两个样地土荆芥的内生真菌在门水平上组成较一致,主要是子囊菌门(Ascomycota)和担子菌门(Basidomycota)。在最佳分类水平即种水平上具有一定的相似性,但各个样品的绝对优势种却不一样。矿渣堆土荆芥地上部分(T1S)的丰度值较高的主要是Erysiphe sp.,Lecanicilium muscarium,Aspergillus flavus,Pleurotus sp.,Leucosporidum golubevii,Coniothyrium cereale,Mucor spp.(Mucor cicinelloides,Mucor sp.(BEA2010));矿渣堆土荆芥地下部分(T1G)的丰度值较高的有Aureobasidium pullulans,Phomopsis columnaris,Holtermannia comiformis,Pseudogymnoascus roseus,Skeletocutis diluta,Cryptococcus spp.(Cryptococcus bhutanensis,Cryptococcusalbidus)。废弃地土荆芥地上部分(T2S)的丰度值较高的主要是Cryptococcusspp.(Cryptococcus sp.(QMW2009a),Cryptococcus dimennae,Cryptococcus victoriae,Cryptococcus oeirensis,Cryptococcus laurentii,Cryptococcus flavus),Filobasidium floriforme Dioszegia zasoltii var;废弃地土荆芥地下部分(T2G)的丰度值较高的只有Purpureocillium lilacinum。通过纯培养与免培养技术对两种土荆芥不同部位内生真菌的多样性进行分析可以发现,来源于不同组织部位的内生真菌多样性存在很大差异,优势种群也不相同。这主要是因为重金属对植物生长具有巨大的毒害作用,植物内生真菌能够增强植物对重金属的抵抗能力,但是因为组织部位不同,不同组织部位重金属含量也不尽相同,所以植物内生真菌在长期的不同的重金属胁迫下就会表现出不同的重金属抗性及促生长能力,再加上与植物的长期协同进化,就会导致不同部位的内生真菌组成及优势种属不同。