论文部分内容阅读
目的:探讨肝X受体(Liver X Receptors,LXRs)对肝脏脂肪酸合成酶(fatty acid synthase,FAS)表达的影响及机制。方法:分别以糖尿病db/db小鼠和对照的db/m小鼠予以LXR激动剂TO901317(3mg/kg/day)灌胃处理7天,TO901317(10μl)刺激人肝癌细胞系(HepG2细胞)24h,LXR或SREBP-1c表达质粒转染HepG2细胞12h,分别采用免疫组织化学、实时荧光定量PCR、蛋白印迹、转染荧光素酶报告基因等方法,检测FAS和固醇调节元件结合蛋白(sterol regulatory element-binding protein-1,SREBP-1)的表达水平及LXR激动剂TO901317对其影响。结果:免疫组化结果显示FAS蛋白在肝脏广泛表达,主要位于肝细胞胞浆内,在中央静脉周围及汇管区表达更明显;同对照组db/m小鼠相比,db/db小鼠肝脏FAS表达量在mRNA水平和蛋白水平均明显增高(mRNA水平约为2.3倍,p<0.05);TO901317可显著降低db/db小鼠空腹血糖水平(12.000±1.061mmol/L下降到7.733±0.6873mmol/L p<0.01)和糖化血红蛋白水平(由5.667±0.095%下降到4.867±0.084% p<0.001);TO901317处理可使db/m小鼠肝脏FAS的mRNA表达升高约3.5倍(p<0.05),db/db小鼠肝脏FAS的mRNA表达升高约1.7倍(p <0.05);db/m小鼠肝脏SREBP-1的mRNA升高约2.4倍(p<0.05),db/db小鼠肝脏SREBP-1的mRNA升高约2.1倍(p<0.01);进一步研究其上调机制,发现TO901317也能上调HepG2细胞FAS的mRNA表达水平,升高约1.9倍(p<0.05);不仅如此,LXR的激活还能增加HepG2细胞中FAS基因启动子活性,过表达LXR或SREBP-1c也能增加HepG2细胞FAS基因启动子活性(p<0.001)。结论:LXR能够通过其本身的直接作用和SREBP-1c的间接作用上调肝脏FAS的表达,LXR可能介导了糖尿病肝脏的脂质生成过程。目的:探讨LXR对肾脏FAS表达的影响及机制。方法:分别以糖尿病db/db小鼠和对照的db/m小鼠予以LXR激动剂TO901317(3mg/kg/day)灌胃处理7天,TO901317(10μl)刺激小鼠近曲小管上皮细胞系(MCT细胞)24h,LXR或SREBP-1c表达质粒转染人胚肾细胞系(HEK293细胞)12h,分别采用免疫组织化学、实时荧光定量PCR、蛋白印迹、转染荧光素酶报告基因等方法,检测FAS和SREBP-1的表达水平及LXR激动剂TO901317对其影响。结果:免疫组化结果显示FAS蛋白在正常小鼠肾脏表达量较高,并相对集中表达于肾脏的近曲小管上皮细胞,并且在髓袢升支粗段、远曲小管和集合管处也有表达;同对照组db/m小鼠相比,db/db小鼠肾脏FAS表达量在mRNA水平和蛋白水平均明显降低(mRNA水平约为0.5倍,p<0.05);TO901317处理可使db/db小鼠肾脏FASmRNA表达升高约2.3倍(p<0.01);db/m小鼠肾脏SREBP-1的mRNA升高约6.1倍(p<0.001),db/db小鼠肾脏SREBP-1的mRNA升高约18倍(p<0.001);进一步研究其上调机制,发现TO901317也能上调MCT细胞FAS的mRNA表达水平,升高约2.5倍(p<0.05);过表达SREBP-1c,也可显著增加MCT细胞中FAS mRNA的表达量,增加约2.8倍(p<0.05);不仅如此,LXR的激活还能增加HEK293细胞中FAS基因启动子活性,过表达LXR或SREBP-1c也能增加HEK293细胞FAS基因启动子活性(p<0.001)。结论:LXR能够通过其本身的直接作用和SREBP-1c的间接作用上调肾脏FAS的表达,LXR可能介导了糖尿病肾脏的脂质代谢紊乱过程。