‘绿岭’核桃离体快繁与多倍体诱导技术

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为建立‘绿岭’核桃组培快繁体系和确立核桃多倍体育种技术体系,分别以‘绿岭’核桃种子、1 a生‘绿岭’核桃实生苗的新梢、5 a生采穗圃的‘绿岭’核桃新梢为材料,研究了‘绿岭’核桃种胚无叶腋芽快繁体系和腋芽快繁体系,通过幼苗茎尖浸润法、幼苗掐茎尖浸润法、新梢掐茎尖浸润法、种仁浸泡法、胚浸泡法、刺激隐芽法、刺激腋芽法对‘绿岭’核桃进行了多倍体诱导并用流式细胞仪对变异株进行了鉴定。主要结果如下:1.种胚无叶腋芽快繁体系的萌发诱导培养基为MS + IBA 1.0 mg/L + 6-BA 1.0 mg/L +蔗糖30 g/L +琼脂6 g/L,种胚无叶腋芽萌发率为100%,增殖系数为5.84,种胚无叶腋芽伸长培养基为MS + 6-BA 2.0 mg/L + IAA 1.0 mg/L + GA3 1.5 mg/L +蔗糖30 g/L +琼脂6 g/L,此培养基上无叶腋芽伸长最长,生长状况最好;腋芽快繁体系的种胚萌发培养基为MS +蔗糖30 g/L +琼脂6 g/L,萌发率和成苗率均为90%,腋芽萌发培养基为MS + 6-BA 2.0 mg/L + NAA 0.2 mg/L +蔗糖30 g/L +琼脂6 g/L,腋芽萌芽率为80%,增殖系数为3.54。2.采用两步生根法诱导生根:将离叶柄基部2 mm切的茎段先在DKW + IBA 8.0 mg/L +蔗糖30 g/L +琼脂6.0 g/L中暗培养20 d,然后转入DKW+蔗糖30 g/L +琼脂6.0 g/L培养基中进行光照培养,生根率为50%。诱导生根的组培苗,移栽到大田后成活率为33.3%。3.幼苗茎尖浸润法、新梢掐茎尖浸润法、种仁浸泡法、刺激隐芽法、刺激腋芽法处理后变异率均为0.0%,幼苗掐茎尖浸润法处理后,1.0%的秋水仙素溶液处理8 d的30株幼苗中有4株变异,变异率为13.3%,对叶片明显变大、变厚、叶色变深、叶片变皱的植株进行倍性鉴定表明,1株是四倍体,3株是混倍体;刚剥的种仁充实期的核桃胚浸泡后,0.4%的秋水仙素溶液浸泡36 h的变异率为23.3%,1株是四倍体,0.8%的秋水仙素溶液浸泡12 h的变异率为20.0%,1株是四倍体,0.8%的秋水仙素溶液浸泡24 h的变异率为50.0%,2株是四倍体,1株是混倍体。
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