低值智利海参的皂苷制备与活性研究

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本论文以低值海参——干制智利海参为实验材料,分析了海参中的营养成分,研究了干制智利海参中皂苷的提取工艺,对提取所得的粗提液进行了分离纯化,测定了分离纯化后海参皂苷的理化性质,并初步研究了其抗氧化、细胞毒活性和酪氨酸酶抑制作用,为实现低值海参高值化利用提供理论基础,促进海参资源综合利用。干制智利海参中蛋白质、多糖含量(干重)分别为54.744%、8.785%,灰分含量(干重)为24.636%;粗脂肪含量(干重)为3.973%,其中不饱和脂肪酸含量为39.329%,DHA占0.355%,EPA占25.376%;无机元素中Na含量最高,为10251.221mg/kg;含有16种氨基酸,其中EAA占氨基酸总量的35.05%,组氨酸含量最高占14.14%。干制智利海参整体营养成分丰富,具有良好的开发利用和食用价值。采用浸提法提取干制智利海参中的皂苷,考察乙醇浓度、提取温度、料液比对皂苷提取的影响,结果表明,干制海参中海参皂苷提取的条件为:采用纯水浸提,提取料液比为1:15,提取温度为20℃,提取时间控制在8 h内。在此条件下提取,皂苷得率高,纯度较好。将得到的浸提液离心,依次用石油醚、氯仿、正丁醇萃取,将正丁醇相用AB-8型大孔树脂经蒸馏水和20%、50%、70%乙醇洗脱,蒸馏水和低浓度乙醇洗脱除去多糖和无机盐,收集70%乙醇洗脱部分。将70%乙醇洗脱部分进行硅胶柱层析,经薄层层析和高效液相色谱分析合并相同组分。通过海参皂苷的普遍定性反应对硅胶柱层析纯化后所得海参皂苷进行鉴定,表明智利海参中海参皂苷属于三萜皂苷。智利海参中海参皂苷的抗氧化活性实验结果表明,石油醚萃取相、氯仿萃取相、正丁醇萃取相、大孔树脂70%乙醇洗脱相、硅胶柱层析洗脱相提取液具有明显的抗氧化活性。其中,对羟基、超氧阴离子自由基的清除能力和总抗氧化能力,在实验设定浓度范围内随提取液浓度上升,清除能力均有提高;随浓度上升对DPPH自由基的清除能力略有下降。采用MTT法测定智利海参中海参皂苷的细胞毒活性。实验结果表明,当海参皂苷粗提物浓度为0.05 g/mL时,对HUB7细胞、L929细胞有明显细胞毒活性。皂苷浓度为10 mg/mL-30 mg/mL时,标准皂苷、正丁醇萃取相、大孔树脂70%乙醇洗脱相、硅胶柱层析洗脱相所得海参皂苷粗提液对酪氨酸酶有轻微抑制活性,并且随浓度上升,抑制率增高。
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