论文部分内容阅读
背景:干燥综合征(Sj gren’s syndrome,SS)是一种以破坏外分泌腺为主的自身免疫性疾病,发病的关键可能在于淋巴细胞与腺泡、导管上皮细胞之间相互作用。研究发现干燥综合征外分泌腺内除了大量淋巴细胞外,同时存在脂肪细胞浸润,推测脂肪因子可能也起着重要作用。脂联素(AdipoQ)是血浆中含量最多的一种脂肪细胞因子,通过脂联素受体AdipoR1和AdipoR2发挥作用,它能调节胰岛素的敏感性,在炎症中更表现出抗炎及促炎双向免疫调节功能。重组腺病毒(recombinant adenovirus,rADV)载体不仅具有较高的基因转染效率,而且有实现外源基因稳定表达的优势,是目前基因治疗中应用最为广泛的载体类型。非肥胖糖尿病(non-obese diabetic,NOD)小鼠作为自发性干燥综合征模型鼠,同时具有唾液分泌功能降低和涎腺淋巴细胞浸润等特征,与人类干燥综合征较为相似。因此,可用作研究干燥综合征外分泌腺病变。脂肪因子和外分泌腺炎症之间的关系如何?本研究将已重组的小鼠脂联素腺病毒(rADV-AdipoQ)转染到小鼠体内,采用酶联免疫吸附、逆转录聚合酶链式反应技术,观察脂联素表达对外分泌腺的影响,明确其是否在慢性炎症中发挥作用。我们设计该项研究,为今后脂联素作为干燥综合征患者的诊断与治疗提供理论依据。目的:观察脂联素在SS模型小鼠组织的表达;通过重组基因体内转染,探讨脂联素在SS模型小鼠炎症中的作用。方法:1.将30只8周龄NOD小鼠随机分为3个处理组:①模型组1(M1):腹腔注射生理盐水;②模型组2(M2):腹腔注射空病毒(rADV);③模型组3(M3):腹腔注射重组脂联素腺病毒(rADV-AdipoQ)。2.4周后处死所有实验组小鼠,通过HE染色比较不同实验组之间颌下腺病理学改变,ELISA检测外周血TNF-α、AdipoQ水平及RT-PCR检测AdipoQ mRNA的表达程度。结果:1.通过对三组小鼠靶腺体病理学观察及评分发现,M1和M2组小鼠间质中均有灶状淋巴细胞浸润,部分腺泡细胞萎缩、变形,数目减少,两组小鼠病理改变较重,多在3~4级;M3组小鼠组织形态学表现有较大改善,腺间质中淋巴细胞中度浸润,导管轻度扩张,未见灶状淋巴细胞浸润、腺体破坏、纤维增生等,小鼠病理改变在2~3级。2.通过对三组小鼠外周血TNF-α浓度,及其与靶腺体病理学评分进行相关分析后发现,与M1组和M2组高表达相比,M3组小鼠外周血TNF-α水平显著降低(P<0.05),而M1和M2组差别无统计学意义(P>0.05);外周血TNF-α水平与靶腺体病理学评分呈显著正相关。3.通过对三组小鼠外周血及靶腺体AdipoQ浓度对比发现,与M1组和M2组相比,M3组小鼠外周血AdipoQ水平、颌下腺AdipoQ mRNA的表达均显著降低(P<0.05);同样M1和M2组差别无统计学意义(P>0.05)。结论:1.rADV-AdipoQ能使SS模型小鼠靶腺体病理学分级改善;2. rADV-AdipoQ能降低SS模型小鼠外周血促炎因子TNF-α的表达,并可降低其外周血及外分泌腺体局部AdipoQ的表达;3.体内转染rADV-AdipoQ抑制了炎症表达,最终导致AdipoQ蛋白及基因的降低,其低表达可能为SS模型小鼠的保护基因。