脱脂麦胚活性肽的制备及其免疫功能研究

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免疫活性肽具有很强的稳定性、比较高的生物活性,并且具有增强免疫力,提高抗感染能力,降低发病率等多种生物活性,是一种生物活性极其重要的物质。本课题选用了碱性蛋白酶对脱脂麦胚蛋白进行水解作用,通过动物免疫试验得知酶解产物具有良好的免疫活性。本文主要研究内容及结果如下:(1)研究了脱脂麦胚蛋白提取工艺的最佳条件,在传统的碱溶酸沉法的基础上添加一定量的α-淀粉酶进行水解,此法明显提高了麦胚蛋白的得率。同时,在单因素试验结果的基础上,使用Box-Behnken中心组合设计以及响应面分析对提取麦胚蛋白的工艺进行优化,试验结果表明最佳的工艺参数为:加水量(料液比)1:15、碱溶pH值为9.5、浸提时间47min。(2)本试验选用碱性蛋白酶对麦胚蛋白水解。根据单因素及其正交试验所确定的最优工艺条件为:pH值8.5、温度50℃、加酶量0.4Au/g、底物浓度1%水解150min,该条件下水解度可达35.62%。(3)选择超滤技术初步分离麦胚蛋白的酶解产物,使用DA201-C大孔吸附树脂吸附纯化酶解物。结果表明DA201-C吸附树脂对酶解物的吸附性能表现良好,最佳的进样浓度与速度分别为50mg/mL和1BV/h。洗脱时乙醇的最适宜浓度与洗脱速度分别为75%和2BV/h,酶解物的最高洗脱率可达96.39%。纯化后,酶解物的脱盐率和回收率可达到85.90%、73.25%。(4)研究了酶解产物的免疫调节作用。使用3000Da的超滤膜对麦胚多肽进行分级后给小鼠灌胃,28天后对小鼠的免疫器官、溶菌酶及免疫球蛋白的含量进行测定,对麦胚多肽的免疫活性进行评价。试验结果表明,3000Da以下的麦胚多肽的免疫活性最强,3000Da以上的麦胚多肽免疫活性次之,麦胚蛋白的免疫活性最弱。
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