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【背景】胃癌的发病率居世界第四位，死亡率居世界第二位。在我国，胃癌严重影响着人类健康，绝大多数患者在就诊时已处于晚期胃癌且发生转移。转移是实体瘤最终造成患者死亡的关键因素。随着分子生物学的发展，越来越多的研究致力于找出肿瘤转移中的关键分子，并试图干预这些分子遏制肿瘤的转移。Coronin3属于短冠蛋白，广泛存在于真核生物中。Coronin3作为F-actin结合和相互作用蛋白，参与并调节肌动蛋白依赖的多种生物学进程，如细胞运动、迁移、吞噬体的形成、胞质分离和轴突的生长等。除此之外，在囊泡的运输中也有重要作用。近年来的研究发现Coronin3除具有冠蛋白共有的生理功能外，还参与多种恶性肿瘤的进展和转移。研究显示Coronin3的表达水平与人弥散型神经胶质瘤的恶性程度相关，下调Coronin3的表达可以显著抑制肿瘤的增殖、迁移、侵袭；研究还发现Coronin3可作为肝细胞癌和黑色素瘤进展的标志物。本研究发现Coronin3在多种胃癌细胞系中表达升高，尤其是在我科建立的高转移细胞系MKN28-M中表达较低转移细胞系MKN28-NM及亲本细胞系MKN28明显增高。通过体外功能学实验和体内实验我们发现Coronin3可以促进胃癌细胞的迁移，因此我们推断Coronin3可能在胃癌的转移中发挥重要作用。【目的】1、研究Coronin3在胃癌淋巴结转移灶和原发灶中的表达情况；检测Coronin3在胃癌细胞系，尤其是胃癌高转移细胞系中的表达情况；2、研究Coronin3在胃癌侵袭和转移等恶性生物学行为中的作用；3、进一步研究Coronin3促进胃癌侵袭和转移的分子机制。【方法】1、Western Blot和qPCR检测多种胃癌细胞系中Coronin3的表达；2、免疫组织化学观察Coronin3在胃癌淋巴结转移灶和原发灶中的表达，共聚焦显微镜观察Coronin3在胃癌细胞中的亚细胞定位；3、设计Coronin3的shRNA序列并包装慢病毒载体，对高表达Coronin3的胃癌细胞系进行感染，建立稳定细胞系；4、流式细胞仪检测细胞凋亡和细胞周期的变化，MTT实验检测细胞增殖能力的改变，平板集落形成实验检测细胞克隆形成能力；5、利用划痕实验、Transwell侵袭实验及裸鼠尾静脉注射体内肝肺脏转移等实验研究Coronin3对胃癌迁移、侵袭以及体内转移能力的影响；6、利用肿瘤转移PCR芯片技术检测下调Coronin3后转移相关基因的表达变化；7、利用qPCR和Western Blot方法验证肿瘤转移PCR芯片结果，寻找Coronin3促进胃癌转移的下游分子。【结果】1、 Coronin3在高转移潜能的胃癌细胞及胃癌淋巴结转移灶中表达上调。利用免疫组织化学检测40例胃癌原发灶和对应的淋巴结转移灶中Coronin3的表达，发现Coronin3在原发灶胃癌中阳性率为53.8％（21/39）,而在转移灶中达85％（34/40）。在胃癌淋巴结转移灶中的表达显著高于原发灶。另外，在胃癌高转移细胞系MKN28-M中，Coronin3的表达显著高于胃癌低转移细胞系MKN28-NM和亲本细胞MKN28。2、下调Coronin3可抑制胃癌细胞的体外迁移、侵袭能力和裸鼠体内肝转移能力。通过构建Coronin3shRNA慢病毒载体，感染细胞后，成功建立了两株稳转细胞系SGC7901-Coronin3-shRNA和MKN45-Coronin3-shRNA。同时用阴性对照慢病毒载体NC-GFP-LV感染细胞后，获得两株对照细胞系SGC7901-NC和MKN45-NC。感染效率均达到90％以上。Western blot和qPCR验证结果显示Coronin3的表达明显被抑制。划痕实验结果显示细胞划痕后的愈合率分别为：MKN45-Coronin3-shRNA（15.5%）、MKN45-NC（54.2%）、MKN45(50.3%)； Transwell侵袭实验显示下调Coronin3的表达后，SGC7901-Coronin3-shRNA和MKN45-Coronin3-shRNA侵袭能力明显下降。裸鼠体内转移瘤实验发现，下调Coronin3后，肝转移灶明显减少。上述结果提示，胃癌细胞中的Coronin3的高表达可能通过促进胃癌细胞的迁移和侵袭，进而促进了胃癌的转移。3、 Coronin3通过调节MMP-9和cathepsin K促进胃癌转移。利用肿瘤转移PCR芯片技术检测MKN45-Coronin3-shRNA、MKN45-NC中84个转移相关基因的表达差异。结果显示下调Coronin3表达，相对差异大于两倍的基因有11个，其中9个基因（CDH11、CDH6、CTSK、CXCR2、ITGA7、MMP-9、SMAD4、TIMP3、VEGFA）表达下调；两个基因（CTSL1、CXCL12）上调。Western blot和qPCR验证结果显示，仅MMP-9和CTSK与PCR芯片结果一致。后续实验还发现，TIMP2的表达升高。上述结果提示Coronin3可能通过上调MMP-9和CTSK以及下调TIMP2的表达促进胃癌转移。【结论】Coronin3在胃癌转移灶中的表达显著高于原发灶；下调Coronin3的表达可显著抑制胃癌细胞迁移、侵袭和裸鼠体内的转移能力；Coronin3通过调节MMP-9和CTSK的表达调节胃癌转移。