目的:脑出血以其高死亡率、高致残率严重危害着人类的身体健康,随着全球,尤其是我国社会人口老龄现象的日趋严重,出血性脑卒中的防治研究已迫在眉睫。改善微循环、增加血流量,减轻脑组织的氧化应激反应,是治疗脑出血的有效手段之一。针灸治疗因其具有安全、有效、简便、经济、无不良反应等优点,已被应用于脑出血的治疗中。但是关于针刺治疗脑出血的时机却一直颇有争议,成为困扰临床治疗的一个难题。因此本实验以胶原酶Ⅶ诱导大鼠尾壳核脑出血为模型,,从脑内氧化应激反应角度研究不同时间点电针对脑组织HO-1和HO-2表达的影响,探讨针刺治疗脑出血的时效性,为临床针刺治疗脑出血提供可靠的实验依据。方法:选择健康wistar雄性大鼠56只,体重在200-250g。按体重编号,代入随机数字表分为正常组、模型组、3h电针组和72h电针组,模型组又分为模型1组、模型2组、模型3组、模型4组;每组8只。模型1组和模型2组分别为造模后3h、72h时即刻处死取材,模型3组和模型4组分别为造模3h、72h后+5d处死取材。造模采用0.5u胶原酶Ⅶ注射大鼠尾壳核(前囟后1mm,正中矢状缝向右4mm,深5mm)诱导大鼠脑出血的方法,造模后所有动物均在江汉大学动物房饲养。3h电针组和72h电针组电针脑出血大鼠穴取水沟穴、内关穴(双侧)、三阴交穴(双侧)。分别于造模后3h、72h时开始针刺,水沟和右侧大鼠耳朵接一对电极,同侧内关和三阴交接一对电极,连续波,频率120次/min,强度1mA,每次留针30min,每日针刺一次,针刺5次。以上七组大鼠均用10%水合氯醛腹腔注射麻醉,开胸经升主动脉依次灌入生理盐水100ml、4℃预冷的含4%多聚甲醛的0.01mol/L磷酸缓冲液(PBS,pH7.4)400ml。灌毕取脑,置于4%多聚甲醛溶液过夜后固定。以注射点为中心冠状石蜡切片,片厚5μm,切10片。HE染色,采用免疫组化法检测血红素氧合酶-1(Heme Oxygenase-1)和血红素氧合酶-2(Heme Oxygenase-2),在400倍高倍镜下随机取血肿周围4个不重叠视野,计数HO-1和HO-2阳性细胞数,统计分析。结果:(1)HE染色结果:正常组脑组织未见明显异常改变;模型1组脑组织内见大量脑出血,神经纤维缠结、断裂,脑组织内未见明显小胶质细胞浸润;模型2组内见少量出血,少许小胶质细胞浸润(少许细胞内出现泡沫)及大量液化性坏死(筛状软坏灶);模型3组脑组织内可见大量小胶质细胞浸润、坏死伴少量出血;模型4组脑组织内可见液化灶缩小及大量小胶质细胞浸润;3h电针组脑组织内可见泡沫细胞浸润及出血;72h电针组脑组织内可见坏死灶明显缩小、小胶质细胞浸润、极少量出血。(2)免疫组化结果:①各组脑组织HO-1的表达模型组HO-1较正常组均升高(P＜0.01),有非常显著性差异;模型3组比模型1组高(P＜0.01),有非常显著性差异;模型4组较模型2组高(P＜0.01),有非常显著性差异;3h电针组较模型3组低,有非常显著性差异(p＜0.01);72h电针组较模型4组低(p＜0.05),有显著性差异;3h电针组较模型1组高(p＜0.01),有非常显著性差异;72h电针组较模型2组高(p＜0.01),有非常显著性差异;72h电针组较3h电针组高(P＜0.01),有非常显著性差异。②各组脑组织HO-2的表达与正常组比较模型1组、模型2组、模型3组梗死灶内未见HO-2阳性神经元;模型4组始有表达,较模型2组高(p＜0.01),有非常显著性差异;3h电针组较模型1组高(p＜0.01),有非常显著性差异(p＜0.01);72h电针组较模型2组高(p＜0.01),有非常显著性差异(p＜0.01);3h电针组较模型3组高(p＜0.01),有非常显著性差异(p＜0.01);72h电针组较模型4组低(p＜0.01),有非常显著性差异;72h电针组较3h电针组高(P＜0.01),有非常显著性差异。结论:(1)氧化应激反应参与了脑出血后脑水肿和神经元的损伤,可能是脑出血损伤的一个重要因素之一。(2)电针可以提高脑出血后脑内HO-1和HO-2的含量,对急性脑出血后神经元的损伤有一定的修复作用。(3)72h电针组治疗效果要比3h电针组治疗效果较好,但是要比模型4组效果较差,说明急性期脑出血早期应该慎重选择电针治疗。