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骨形态发生蛋白（BMPs）是TGF-β超家族中最大和增速最快的成员，近年来，随着研究成果的不断深入，发现其不光在诱导软骨及骨组织定向分化中作用强大，在中胚层诱导、肢体发育、牙齿发育、造血细胞形成及动物繁殖性状表达等方面也起着重要作用。本研究在实验室前期工作的基础上，对BMPs进行克隆测序及电子克隆分析，研究了新西兰白兔在不同发育时期及不同组织中的时空差异性表达，以期确定BMPs在不同发育阶段中所起的作用，从基因角度阐明新西兰白兔的组织表达谱规律。根据NCBI中GenBank已经公布的人、猪、牛、绵羊、小鼠和大鼠骨形态发生蛋白2（BMP-2）和骨形态发生蛋白4（BMP-4）的序列，利用计算机软件DNAMAN进行基因序列的同源性比对，找出BMP-2基因和BMP-4基因cDNA的保守区域，设计特异性引物，采用RT-PCR技术克隆这两种基因，利用克隆的序列作为探针继续进行电子克隆，用生物信息学软件对两种基因的分子结构和特征进行分析和预测，然后采用实时荧光定量PCR方法在mRNA水平上检测两种基因在新西兰白兔不同发育时期中卵巢、子宫、输卵管、肾脏、肝脏、脾脏和十二指肠组织的表达情况。通过上述方法得出如下试验结果：1、根据保守区域，设计特异性引物，采用RT-PCR方法从新西兰白兔卵巢、输卵管、子宫中扩增BMP-2和BMP-4基因部分cDNA序列，片段长度分别为299bp和175bp。2、分别以克隆测序出的BMP-2和BMP-4部分cDNA序列为探针，在nr数据库及EST数据库中电子克隆两个基因，克隆后的BMP-2基因为1150bp，BMP-4基因为920bp。3、应用生物信息学软件分析电子克隆BMP-2和BMP-4基因，其中BMP-2基因CDS区全长1149bp，编码383个氨基酸；BMP-4基因CDS区全长918bp，编码306个氨基酸。4、利用生物信息学方法和相关软件分析新西兰白兔BMP-2和BMP-4基因的同源性，试验结果表明：新西兰白兔BMP-2基因核苷酸序列与羊（XM004014353）一致性为86%，与牛（BC134682）一致性为86%，与猪（EU854587）一致性为86%，与小鼠（BC100344）一致性为93%，与大鼠（L20678）一致性为93%，与人（AB463447）一致性为87%；新西兰白兔BMP-4基因核苷酸序列与羊（AF508312）一致性为93%，与牛（NM001045877）一致性为94%，与猪（EU334835）一致性为94%，与小鼠（BC013459）一致性为91%，与大鼠（NM012827）一致性为92%。5、通过实时荧光定量PCR技术检测到新西兰白兔BMP-2基因在30日龄、60日龄和180日龄中卵巢组织中相对表达含量最高，在120日龄中肝脏组织中相对表达量最高；而BMP-4基因则在60日龄和180日龄中卵巢组织表达含量最高，30日龄中十二指肠表达含量最高，妊娠6天的母兔中肝脏表达含量最高。6、两基因同一组织在不同生长发育时期的表达规律表现为：卵巢中BMP-2的mRNA变化幅度最大，60日龄达到最高峰，输卵管、子宫、脾脏均在120日龄时表达含量最高，30日龄时肝脏表达含量最高；卵巢中BMP-4的mRNA在60日龄时表达含量最高，输卵管、子宫、肾脏、肝脏、脾脏则在妊娠6天母兔中表达含量最高，十二指肠在30日龄表达含量最高。7、BMP-2基因和BMP-4基因在卵巢组织中都有较一致的表达趋势，即60日龄最高，后下降，到180日龄又呈现上升趋势。在十二指肠中的表达也存在明显的相似性，即随着日龄的增大，两基因的表达呈现出下降趋势。