【摘 要】
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本研究是对马耳他布鲁菌omp31基因进行原核表达,并建立了以重组OMP31蛋白,作为间接ELISA方法的检测抗原,检测阳性血清中因感染牛种布鲁菌而致病的血清。主要研究结果如下：1.布
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本研究是对马耳他布鲁菌omp31基因进行原核表达,并建立了以重组OMP31蛋白,作为间接ELISA方法的检测抗原,检测阳性血清中因感染牛种布鲁菌而致病的血清。主要研究结果如下：1.布鲁菌omp31的原核表达与抗原性检测采用聚合酶链反应技术(PCR)从内蒙古分离的马耳他布鲁菌扩增得到布鲁菌omp31基因片段并插入PMD18-T载体克隆测序,将目的基因插入原核表达载体pET-30a中,转入大肠杆菌BL21(DE3)中进行表达,用SDS-PAGE和western-blot检测该蛋白。结果成功构建了重组质粒pET-30a-omp31并在大肠杆菌中,成功表达了omp31基因,重组蛋白能与马耳他布鲁菌阳性血清发生特异性反应。2.间接ELISA法检测牛种布鲁菌病的建立及应用以重组OMP31蛋白作为包被抗原,筛选确定了间接ELISA检测方法的最佳反应条件。重组OMP31蛋白最佳抗原包被浓度为2.5μg/ml(稀释800倍);血清的稀释度为100倍：封闭液为1%BSA,于37℃封闭2h;酶标二抗反应条件为1：5000倍稀释;OMP31蛋白包被孔的阴、阳性临界值为0.337。特异性结果显示,OMP31蛋白包被孔与免疫S19疫苗的牛、羊阳性血清和标准牛、羊阴性血清不发生交叉反应。ELISA的重复性实验重组OMP31蛋白包被孔的批内与批间检测结果的变异系数均低于10%。以上结果显示,该间接ELISA方法有很好的重复性,特异性,敏感性,因此可以作为血清学方法来诊断有牛种布鲁菌感染的布鲁菌病。
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