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乳腺癌(breast cancer)是妇女最常见的恶性肿瘤之一，近20年来发病率呈明显上升趋势，严重危害妇女的身心健康。乳腺癌治疗失败的主要原因是肿瘤的局部浸润和向重要脏器的远处转移，利用分子生物学手段寻找与肿瘤侵袭转移相关的因子已成为近年来医学界研究的热点。MTA1是近年来分离出的肿瘤转移相关基因，已有实验证明该基因的过度表达与多种恶性肿瘤的侵袭和转移关系密切。MMP-9是MMPs(基质金属蛋白酶家族)中的一员，TIMP-1是其特异性抑制物，二者的表达及代谢失衡与肿瘤的侵袭、转移和临床预后有密切关系。本研究运用荧光实时定量PCR技术检测了乳腺癌组织和配对正常乳腺组织中MTA1mRNA的表达，并运用免疫组化技术检测了MTA1、MMP-9、TIMP-1蛋白的表达情况。分析三者与乳腺癌临床病理指标的关系，并探讨三个指标之间的相关性，旨在寻找可以较准确预测和诊断乳腺癌侵袭和转移的生物学指标，为乳腺癌的临床治疗提供更多的实验证据。实验方法1．实验对象选择、组织样本的采集与患者临床资料的整理选取2005年至2006年在郑州大学第一附属医院就诊的乳腺癌患者作为研究对象，采集手术后乳腺癌原发灶及配对正常乳腺组织标本56对。搜集患者的性别、年龄、肿瘤大小、病理类型等方面的临床资料，便于统计分析和研究。2．采用Trizol试剂提取乳腺癌组织RNA。通过1.0％的琼脂糖凝胶电泳及RNA的OD值评估RNA的含量和纯度。3．使用Promega公司的AMV逆转录试剂盒进行cDNA的逆转录。PCR扩增β-actin检测逆转录效果。4．设计MTA1和β-actin基因引物。5．对MTA1基因在乳腺癌原发灶及配对正常乳腺组织中表达量进行实时荧光定量PCR检测。6．建立标准曲线进行实验质量控制。7．免疫组化方法检测MTA1、MMP-9和TIMP-1三种蛋白的表达情况。8．运用SPSS12.0统计软件，采用方差分析、卡方检验和t-检验等方法对实验数据进行统计学处理。按α=0.05水准双侧概率确定结果有无统计学意义。实验结果1．荧光实时定量PCR结果显示：83.9％(47／56)的乳腺癌原发灶标本MTA1mRNA的表达量显著高于配对正常乳腺组织(P＜0.05)。MTA1mRNA表达量在淋巴结转移组显著高于无淋巴结转移组，临床分期Ⅲ、Ⅳ期组显著高于Ⅰ、Ⅱ期组，组织学分级Ⅲ级组显著高于Ⅰ、Ⅱ级组，随着肿瘤大小的增加，MTA1mRNA的表达量也呈升高的趋势(P＜0.05)。免疫组化检测MTA1蛋白结果和PCR结果吻合，呈现一致的变化趋势。2．乳腺癌中MMP-9蛋白阳性表达率是73.2％(41／56)，显著高于配对正常乳腺组织14.3％(8／56)(P＜0.05)。MMP-9蛋白表达率在淋巴结转移组显著高于无淋巴结转移组，临床分期Ⅲ、Ⅳ期组显著高于Ⅰ、Ⅱ期组(P＜0.05)。3．乳腺癌中TIMP-1蛋白阳性表达率是51.8％(29／56)，显著高于配对正常乳腺组织10.7(6／56)(P＜0.05)。TIMP-1蛋白表达率在无淋巴结转移组显著高于淋巴结转移组，临床分期Ⅰ、Ⅱ期组显著高于Ⅲ、Ⅳ期组(P＜0.05)。4．相关性分析显示：MTA1与MMP-9、MMP-9与TIMP-1蛋白阳性表达率之间均存在显著关联性(r=0.363，P＜0.01；r=0.323，P＜0.05)。结论1．MTA1基因的高表达可能阻碍乳腺癌细胞的分化成熟，促进肿瘤的侵袭和转移。2．MMP-9蛋白的表达水平与乳腺癌侵袭转移能力呈正相关。3．TIMP-1蛋白的表达水平与乳腺癌侵袭转移能力呈负相关。4．MMP-9与TIMP-1表达关系密切，在乳腺癌浸润和转移过程中起着拮抗作用，MMP-9／TIMP-1的动态表达平衡在维持细胞外基质完整的过程中起主要作用。5．MTA1可能在基因转录水平上调MMP-9的表达，进而使MMP-9／TIMP-1表达失衡，破坏细胞外基质的完整性，从而参与恶性肿瘤的侵袭和转移过程。6．联合检测MTA1、MMP-9、TIMP-1的表达水平，可以预测乳腺癌浸润转移的潜能，为临床治疗和判断预后提供依据。7．MTA1和MMP-9有望成为乳腺癌基因靶向治疗的新靶点。