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目前研究最多的微小RNA(MicroRNA(miRNA),它们是高度保守的非编码RNA分子,由19-25个核苷酸组成,在细胞凋亡、细胞周期阻滞及细胞分化中起着关键的作用。在本实验中主要研究MicroRNA-449a,它是细胞凋亡、细胞周期停滞、细胞分化强有力的诱导剂,所以进一步探讨miR-449a对细胞凋亡的调控作用,为将来对肿瘤的治疗及预后有指导意义。Bcl-2家族是调节凋亡的线粒体相关蛋白,由Tsujimoto等从淋巴瘤中克隆,而命名为B细胞淋巴瘤/白血病-2(B cell lymphoma/leukemia-2,Bcl-2)。Bcl-2家族成员可分为两大类:(1)抗凋亡蛋白类型:主要包括Bcl-2、Bcl-x L、Bcl-w、A1、Mcl-1等,具有抗凋亡作用。(2)促进凋亡蛋白类:该类型成员具有促进凋亡的作用,主要包括:Bax、Bak1、Bok、Bid、Bad等。Bcl-2家族蛋白是必不可少的细胞凋亡调控因子,是位于染色体18q21.3上的BCL2基因编码的。BCL-2作为一类细胞凋亡相关基因,在调控细胞凋亡、降低缺血再灌注损伤、抗肿瘤方面具有重要作用,更是在癌症发生和发展中的关键因素。为进一步深入研究BCL-2的表达及调控机制,对更好的治疗肿瘤等疾病具有重要意义。目的:在本研究中我们探讨miR-449a对人永生化角质形成细胞(HaCaT)中Bcl-2表达的调控,及诱导细胞凋亡的机制,以及进一步对肿瘤的治疗及预后有指导意义。材料和方法:首先进行HaCaT细胞培养,然后将miR-449a转染入HaCaT细胞中,分别对转染后24h、48h、72h的HaCaT细胞进行相对应的RNA提取及蛋白提取,将标本冻存在-80℃冰箱保存。再将提取的RNA及蛋白利用逆转录聚合酶联反应(RT-PCR)及蛋白印迹法(Western blot)检测bcl-2的表达量。实验结果:转染过mi R-449a的HaCaT细胞系中,经过RT-PCR及Western blot检测方法,发现转染的miR-449a时间越长,BCL-2的表达情况是明显下降的。结论:miR-449a是细胞凋亡有效的诱导剂,可以有效抑制抗凋亡基因BCL-2的表达,从而可能促进细胞凋亡。