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目的 甲胎蛋白(AFP，alpha-fetoprotein)自被发现以来，作为一个胎儿异常和肿瘤的标志物，在临床诊断和病情监测等方面发挥了重要作用，其在临床中的意义受到人们的充分研究。然而这几十年中，甲胎蛋白的生理学功能及其在肿瘤发生发展中的生物学作用受到的关注却相对较少，只是在最近十年中人们才意识到甲胎蛋白在肿瘤生长中的调节作用并开始实验研究。我们以可特异表达甲胎蛋白的人类胃腺癌细胞株(AFP-producing gastric adenocarcinoma cell line，FU97)为研究目标，利用RNA干涉技术，针对甲胎蛋白基因的不同靶序列，构建了三个能在哺乳动物细胞中表达小发夹RNA的表达质粒，pSIREN-DNR-DsRed-Express Donor Vector—AFP—siRNA1／2／3(简写为pDonor Vector—AFP-siRNA1／2／3)，分别观察其在FU97中对甲胎蛋白基因的沉默作用，并研究抑制甲胎蛋白基因后对此肿瘤细胞生长及凋亡的影响，由此我们可以研究甲胎蛋白在AFP相关肿瘤发生发展中的作用，并探讨其在AFP相关肿瘤的基因治疗方面潜在的应用价值。方法 首先选择3个符合条件的AFP特异性RNA干涉靶序列，这三段序列分别为：①CAGGGAGACATTCATGAAC，起始于508位，GC含量为47％②CTGGAACGTGGTCAATGTA，起始于968位，GC含量为47％③GGCTGACATTATTATCGGA，起始于1474位，GC含量为42％；然后分别体外合成两段互补的寡核苷酸，与线性载体pSIREN-DNR-DsRed-Express Donor Vector连接；确定构建成功后，利用转染试剂将3个重组质粒(pDonor Vector-AFP-siRNA1／2／3)和对照质粒(包括阳性对照，阴性对照，空白对照)分别导入FU97中，同时此载体可独立表达DsRed荧光蛋白，