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目的：采用细菌内同源重组法高效制备含人γ干扰素基因(human interferon-γ)的重组腺病毒。方法：hIFN-γ基因通过带限制性酶切位点的引物，白质粒pORF-hIFNg中PCR扩增获得，经过T-A克隆并作酶切鉴定和测序确认，形成pGEM-hIFN-γ；自pGEM-hIFN-γ中酶切出hIFN-γDNA片段，亚克隆至腺病毒穿梭质粒pShuttle-CMV中，构建成穿梭质粒pShuttle-CMV-hIFN-γ。在电转感受态大肠杆菌BJ5183内与腺病毒骨架质粒pAdEasy-1同源重组，得到重组腺病毒载体pAd-hIFN-γ。通过转染人胚肾细胞(293细胞)包装出重组腺病毒Ad-hIFN-γ。结果：线性化的pShuttle-CMV-hIFN-γ转化含pAdEasy-1的高效感受态大肠杆菌BJ5183，获得阳性重组质粒pAd-hIFN-γ，经酶切获得30Kb的大片段和3Kb或4．5Kb的小片段DNA，PCR反应扩增出501bp的片段，与目的基因片段大小一致；并通过转染293细胞包装出重组腺病毒。结论：应用细菌内同源重组能快速构建含hIFN-γ基因的重组腺病毒载体pAd-hIFN-γ，并通过转染包装出重组腺病毒，为hIFN-γ基因治疗的进一步研究及应用奠定了基础。