目的对维吾尔药新疆核桃分心木进行系统的研究,阐述核桃分心木治疗肾阳虚证的基本作用机制,并利用经典肾阳虚小鼠模型筛选分心木有效部位;对分心木的主要化学成分进行定性分析、含量测定,并对其有效化学成分进行分离纯化、理化性质研究及结构鉴定等,为研发治疗肾阳虚证新药和开发利用维吾尔药核桃分心木提供科学依据。方法1.分心木主要化学成分的初步研究:采用试管预试法对采自新疆和田地区的分心木进行主要化学成分的定性分析。采用人参皂苷Rb1为标准品,紫外分光光度法测定分心木中总皂苷的含量;采用苯酚-硫酸法测定分心木中多糖的含量;结合相关文献报道,分析分心木中主要化学成分,即生物碱、黄酮、皂苷、多糖、鞣酸等化学成分的含量分布。2.分心木的药理作用研究:以大剂量氢化可的松造成小鼠肾阳虚模型后,分别以分心木水饱和正丁醇提取部位、95%乙醇提取部位和水提取位给予干预,观察小鼠体征变化、体重增长率、下丘脑-垂体-肾上腺轴相关脏器系数等指标变化以及肾脏的病理组织学改变。阐述分心木不同溶剂部位对肾阳虚小鼠模型的影响,并分析分心木治疗肾阳虚证有效部位的作用机制。3.分心木有效部位化学成分的分离纯化及结构研究:核桃分心木有效部位,即水饱和正丁醇部位、95%乙醇部位和水部位,分别以聚酰胺柱色谱、大孔树脂AB-8柱色谱和大孔树脂AB-8柱色谱分级,各级分别采用聚酰胺、Sephadex LH-20等色谱填料进行分离纯化,以UV、Sephadex LH-20凝胶柱色谱、冻融分析法和薄层层析等相结合的方法检测各单体化合物的纯度。采用UV、IR、NMR等现代光谱技术进行单体化合物的结构鉴定。结果1.分心木化学成分定性实验初步证明,分心木主要包含挥发油、油脂、生物碱、黄酮、三萜皂苷、鞣质、有机酸或酚性成分、糖类、氨基酸、多肽或蛋白质等,未检出内酯或香豆素、强心苷类、甾体或三萜类。通过对比研究,分心木中黄酮含量最高,多糖次之,这与试管法预试结果中这几类成分的鉴定结果基本保持一致。2.分心木药理实验结果表明,①肾阳虚模型组小鼠出现大剂量皮质激素所致的全身耗竭现象,分心木各溶剂部位对小鼠的全身耗竭现象出现不同程度的改善;②模型组小鼠体重与空白组小鼠体重比较差异显著(P<0.01)。给药7日后,与空白组小鼠体重比较,肾阳虚组和水煎液高、中、低剂量组小鼠体重较低,差异均有统计学意义(P<0.05);与肾阳虚组小鼠体重比较,水饱和正丁醇低剂量组和水煎液低剂量组小鼠体重较高,差异均有统计学意义(P<0.01);与治疗组小鼠体重比较,各溶剂提取物组小鼠体重均较高,但差异均无统计学意义(P>0.05);③与空白组小鼠肾上腺系数比较,肾阳虚组小鼠肾上腺系数较低,差异有统计学意义(P<0.01);与肾阳虚小鼠肾上腺系数比较,治疗组、水饱和正丁醇高、中、低剂量组小鼠肾上腺系数较高,差异均有统计学意义(P<0.01,P<0.05,P<0.05,P<0.05);与治疗组小鼠肾上腺系数比较,分心木各溶剂组均较低,差异均无统计学意义(P>0.05);④空白对照组小鼠肾小球、肾小管和肾间质均正常,结构清晰,无异常病理表现;肾阳虚组小鼠可见肾小球毛细血管中度扩张,轻度大细胞型硬化,肾小管上皮细胞水肿变性、坏死,肾间质有明显的出血症状;治疗组小鼠除肾小管上皮细胞水肿、肾间质有出血症状外,无其它异常病理表现。水饱和正丁醇高、中、低剂量组不同程度上改善肾小球毛细血管扩张、肾小管上皮细胞水肿、肾间质出血等症状。95%乙醇部位和水煎液部位对肾阳虚小鼠肾脏功能改变无明显的影响。3.利用聚酰胺柱色谱、大孔树脂AB-8柱色谱、Sephadex LH-20柱色谱等等技术从核桃分心木各有效部位分离得到8个化合物。其中,其中,有2个黄酮类化合物Fr.Ⅲ(20.3mg)和Fr.Ⅴ(20.2mg)、6个多糖类化合物Fr.Ⅰ(24.0mg)、Fr.Ⅳ(9.3mg)、FrⅥ(15.4mg)、Fr.Ⅶ(8.8mg)、Fr.Ⅷ(30.5mg)和Fr.Ⅸ(29.8mg)。并用三种展开系统对所得黄酮化合物进行TLC检测,结果表明化合物Fr.Ⅲ和Fr.Ⅴ为相同的纯化合物;用紫外分光光度法、SephadexLH-20(15mm×80 cm)凝胶柱色谱法和冻融分析对多糖类化合物进行纯度检识,表明Fr.Ⅰ、Fr.Ⅳ、FrⅥ、Fr.Ⅶ、Fr.Ⅷ和Fr.Ⅸ六个多糖化合物是纯度较高的均一多糖。对上述化合物进行化学定性分析和结构解析(UV、IR、1H-NMR、13C-NMR等)。确定化合物Fr.Ⅲ和Fr.Ⅴ为:为5,7,8,3’,4’-黄酮醇-3-O-α-D-鼠李糖苷(5,7,8,3’,4’-flavonol-3-O-α-D-rhamnoside)。结论1.完成核桃分心木化学成分的定性分析,有利于对其有效成分的提取、分离及纯化研究,为今后深入研究与开发利用该资源提供一定的研究基础;对几种主要成分含量测定结果与试管法预试结果中这几类成分分析结果基本保持一致。2.维吾尔药核桃分心木对氢化可的松所致小鼠的“阳虚”症状确有改善;其中,水饱和正丁醇提取物(主要包含苷类,如黄酮苷等)作用明显,这可能是治疗肾阳虚的药理依据。分心木在一定程度上改善氢化可的松所致小鼠的肾脏功能。3.从核桃分心木中分离纯化得到两个相同的黄酮苷,为5,7,8,3’,4’-黄酮醇-3-O-α-D-鼠李糖苷(5,7,8,3’,4’- flavonol-3-O-α-D-rhamnoside);6个均一多糖组分,并对其一级结构进行了1H-NMR和13C-NMR初步的解析。八种单体成分均为首次从核桃分心木中得到。