抗草鱼呼肠孤病毒药物筛选细胞模型及分子检测方法的建立

来源 :华中农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:edward109
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
草鱼(Ctenopharyngodon idellus)是我国重要的淡水养殖品种之一,占我国淡水鱼总产量的20%左右。草鱼以其生长快,饲料来源广及肉质鲜美等优点而深受广大养殖者与消费者欢迎。但是,由于草鱼易患多种疾病,而严重制约了草鱼养殖业的发展,特别是病毒性草鱼出血病,其发病时间长,流行区域广,死亡率高,造成了严重的经济损失。因而,草鱼出血病的防控技术研究一直是科研工作者长期的研究重点。免疫预防方法是预防草鱼出血病最为有效的方法。由于免疫预防技术离大规模生产应用尚有较大的距离,因此,寻找有效的药物来预防和治疗草鱼出血病对草鱼养殖业健康发展有重要意义。   本研究以草鱼肾脏细胞系(CIK)和草鱼呼肠孤病毒(GCRV)为材料,进行抗病毒药物筛选研究。采用四噻唑盐染色法(MTT)方法进行了穿琥宁、板蓝根、黄芩、利巴韦林等药物抗GCRV的效果评价,建立了体外抗GCRV药物筛选的细胞模型。采用实时荧光定量PCR技术,直接检测病毒核酸量的变化评价药物抑制病毒的作用效果,建立了体外抗GCRV药物筛选的分子检测方法。   MTT研究结果,在先给药后感染试验组,穿琥宁在阻断GCRV吸附和侵入细胞时效果最强,其次是利巴韦林和板蓝根,黄芩的阻断效果最弱,其治疗指数分别为810±47,108±13,35.28±8.35和18.08±3.76。在先感染后给药的试验中,穿琥宁、利巴韦林和黄芩抑制GCRV增殖的作用显著,治疗指数分别为358±26,555±48和74.2±12.53,板蓝根抑制病毒增殖的作用不明显。在药物与病毒先共同孵育后感染的试验组中,利巴韦林对GCRV有一定直接杀灭作用,其治疗指数为102±16,黄芩、板蓝根和穿琥宁等的体外杀病毒效果不明显。   在分子检测技术中,以GCRV-VP6蛋白编码基因为模板,采用实时荧光定量PCR技术,测定药物试验组与对照组病毒感染细胞后的GCRV-VP6编码基因的拷贝数,先感染后给药的研究结果表明,穿琥宁试验组检测不到GCRV-VP6编码基因,利巴韦林试验组中GCRV-VP6编码基因的相对拷贝数为病毒感染对照组的3.51±0.62%,板蓝根和黄芩试验组的GCRV-VP6相对拷贝数为对照组的25.34±2.48%和34.62±4.18%。分子检测结果与MTT法基本相符。
其他文献
摘 要 基于相应的国家规范,通过行业部门普查、抽样调查、统计分析以及文献资料调研和逻辑分析等研究方法,本文对大连市区居民健身休闲与体育消费进行调查,从中分析体育消费总体水平、消费结构的现状及影响因素并探讨体育消费结构存在的问题。研究发现,大连市居民消费者的样本特征明显,大连城市居民体育用品消费在体育消费中占有重要地位。在体育消费结构中,以实物性体育消费为主,体育消费结构存在失衡问题。问题的主要原因
本文通过文献资料法、实验法、数理统计法对多样化手段在6-8岁儿童游泳初学者中的应用进行了研究,得出应该遵循儿童心理的特点,采用多样化手段,让学生到水中体验到水的快乐,
摘 要 优秀羽毛球运动员各年龄阶段的训练计划是世界各国共同关注的训练问题,同样也引起我国羽毛球队以及广大羽毛球爱好者的广泛关注。本文通过我国优秀羽毛球运动员全程多年训练过程的分析,分析了各年龄阶段训练的主要内容以及存在的几个问题,通过分析得出我国优秀羽毛球运动员各年龄阶段训练计划应该改进和提高的地方。  关键词 全程多年训练 训练计划 人才培养 羽毛球  羽毛球是我国优势体育项目,素有“国羽”之称
摘 要 随着体育教学的深化改革,以往的体育教学模式及教学方法已经无法满足新时期的教学要求,需要积极改革体育教学,以此促进教育质量的提高。表象训练作为一种有效的心理训练法,将其应用于背越式跳高教学中,可以让学生在跳高训练中通过心理训练,将大脑思维与身体运动进行有效融合,充分发挥自身的主观能动性,提高心理技能,促进动作要领的强化以及动作技术的完善,实现体育教学的目标。本文就对背越式跳高教学中表象训练法
摘 要 本文就准备活动对柔道训练的重要性展开分析,从概念释义的角度出发,阐述了准备活动和柔道训练的正确概念,并依据相关概念,提出了准备活动可以减少运动伤害、提升训练效果和帮助受训者提升身体素质。本文旨在通过有益的探索和讨论,帮助受训者和教练员正确认识准备活动的重要意义。  关键词 准备活动 柔道训练 重要性分析  一、柔道训练和准备活动  (一)柔道训练  柔道训练是为了提升学员的柔道水平和身体素
白斑狗鱼作为乌伦古湖中的顶级肉食性鱼类,在维护乌伦古湖的鱼类群落结构稳定方面具有重要的生态学意义,同时又是该湖重要的经济鱼类之一。对其生物学特征进行较为全面系统的
摘 要 学校体育训练可以说是我国竞技体育的基础,它直接关系到我国体育事业的持续发展,具有不可替代的作用。与此同时,积极开展学校体育训练,增强学生体质,培养德智体美全面发展的优秀体育人才,是整个学校体育工作的重要任务,也是培养优秀运动员的重要途径,在训练中的问题进行了简要分析。  关键词 学校体育训练 问题 方法  一、思想品德  在学校训练的过程中,很多教练员只注重成绩的高低,忽略了对队员的思想品
摘 要 任何事物的发展都是以科学的方法与理论为基础,现代足球的发展也是如此,只有保证足球防守战术的恰当性与科学性,才能实现足球运动的长远发展。当前足球运动作为第一大运动,在足球运动竞赛中以获得胜利为目的,这就需要有进攻,但是现代足球战术更为复杂,运动员的角色也更加多能,足球防守的价值越来越受到人们的关注。本文就对现代足球防守战术原理及其运用进行分析和探讨。  关键词 现代足球 防守战术 原理 运用
摘 要 对于柔道这项竞技体育项目来说,它本身的特点就是对抗性十分的强,所以柔道运动员就需要具备的身体素质也非常的高,他们不仅需要掌握柔道专业的技术,还需要具备良好的爆发力、速度等等,而这些能力都是需要通过对他们进行力量训练才能够得以实现的。本文笔者主要分析在柔道教学中的力量训练还有它的重要性。  关键词 柔道教学 力量训练 重要性  力量对于一个人来说是活动的最基本的要素,对于经常运动的运动员来说
摘 要 随着篮球运动的不断发展,攻击性防守作为一种积极主动的防守进攻战术,早已成为篮球运动者应该具备的一项技能。文章首先对攻击性防守进行了概述说明,之后主要对篮球训练中攻击性和防守能力的培养进行了探讨,以这样的方式增强篮球训练的科学性。  关键词 篮球训练 高中体育 攻击性防守  “攻守平衡”在迅速发展的篮球运动面前显得力不从心了,篮球运动者显然需要更高超的技术。攻击性防守就这样运应而生,篮球技术