大丽轮枝菌的致病机制一直是棉花黄萎病研究中的重点之一。本研究通过生物信息学分析方法对大丽轮枝菌的落叶型分子标记(MM15)进行基因组定位,通过农杆菌介导的遗传转化法(ATMT)敲除野生型落叶型菌株XJ592中的MM15、Vdcut14(VDAG＿00445)和VDAG＿00446基因,通过比较敲除突变体和野生型之间的致病力、生长速率、压力筛选等表型的差异,以期探究该分子标记及其邻近的基因在大丽轮枝菌营养生长及致病过程中所发挥的功能。本研究中的MM15、Vdcut14和VDAG＿00446均为首次报道。结果如下:1.本研究通过BLAST分析发现MM15位于VDAG＿00445和VDAG＿00446基因之间,长度为15 bp。2.ATMT法敲除野生型落叶型菌株XJ592中的Vdcut14、VDAG＿00446和MM15后,获得VdΔcut14-3、13、16,VdΔ00446-4、24,VdΔMM15-7、13、14、15、17共10株敲除突变体。Southern blot试验确定VdΔcut14-3、13为单插入突变体,ATMT法遗传互补获得3株互补突变体VdΔcut14/Vd CUT14-27、29、44。3.致病力鉴定试验发现,接种后第3周野生型落叶型菌株XJ592、敲除突变体VdΔMM15与接种非落叶型菌株XJ511、敲除突变体VdΔcut14、VdΔ00446的棉苗相比,发病较早且重;第5周时除XJ511和VdΔ00446-24病情指数小于80外,其余所有处理病情指数均在80以上。结果表明MM15与大丽轮枝菌的致病力无关,Vdcut14基因增强大丽轮枝菌致病力。4.过氧化氢胁迫试验发现,接种后第3天敲除突变体VdΔcut14-3与野生型落叶型菌株XJ592相比抑菌圈直径显著减小,接种后第14天VdΔcut14-3与XJ592和VdΔcut14/CUT14-27、29、44相比微菌核产量减少。表明Vdcut14抑制大丽轮枝菌对过氧化氢的敏感性。5.产孢量测定试验发现敲除突变体VdΔcut14-3与落叶型野生型菌株XJ592和互补突变体VdΔcut14/CUT14-27、29、44相比,产孢量显著增多,说明该基因抑制了大丽轮枝菌无性孢子的产生。VdΔcut14在压力筛选、穿透能力和生长速率方面与野生型菌株XJ592均无显著性差异,说明该基因不参与压力胁迫响应、营养菌丝的生长和穿透过程。