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目的：(1)观察 p38 丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)、磷酸化 p38 丝裂原活化蛋白激酶(p-p38MAPK)、转化生长因子β1(TGF-β1)在不同时期cGVHD狼疮样肾炎小鼠肾组织的表达情况,初步探讨p38MAPK是否参与了cGVHD狼疮样肾炎小鼠的发病及病情进展；(2)用氟伐他汀作为干预因素,研究其是否可通过影响p38MAPK、p-p38MAPK、TGF-β1的表达延缓cGVHD狼疮样肾炎小鼠肾纤维化进程,以及不同剂量氟伐他汀对不同时期oGVHD狼疮样肾炎小鼠肾脏纤维化的疗效差异。
方法：将48只雌性(C57BL/6J×DBA/2)F1代杂交鼠随机分成模型对照组(A组)、低剂量氟伐他汀干预组(B组5mg/(kg·d))、高剂量氟伐他汀干预组(C组1Omg/(Kg·d))和正常对照组(D组),每组12只。A、B、C组小鼠建立cGVHD狼疮样肾炎模型,B、C组小鼠每日氟伐他汀灌胃,A、D组小鼠等体积生理盐水灌胃。自首次注射淋巴细胞第二周开始,每隔两周收集一次各组小鼠24h尿液,并用双缩脲比色法测定尿蛋白量。第12、16周末分别随机处死各组中的6只小鼠(12周组为1组,16周组为2组,即A、B、C、D组小鼠分为A1、B1、C1、D1和A2、B2、C2、D2组),留取肾组织标本,采用HE和Masson染色观察肾脏组织病理学变化,并用免疫组织化学及Western blot法检测p38MAPK、p-p38MAPK、TGF-β1蛋白定位及定量表达,应用RT-PCR法检测p38MAPK、TGF-β1mRNA的表达。
结果：(1)cGVHD狼疮样肾炎小鼠自第4周开始出现尿蛋白,且尿蛋白量逐渐升高,A、B、C组各时间点的24h尿蛋白量均高于D组小鼠(P<0.01),经氟伐他汀干预后尿蛋白量明显下降(P<0.01),C组尿蛋白量与B组比较差异亦有显著性(P<0.05)；(2)HE染色显示A组小鼠肾小球系膜细胞和内皮细胞增生,可见萎缩硬化的肾小球；肾小管扩张或呈多灶性萎缩及空泡变性,管腔内可见大量蛋白管型,间质中有大量单个核细胞浸润和基质沉积；A2组小鼠肾小球硬化及肾间质基质沉积较A1组更为明显；药物干预组(B、C组)小鼠上述病变减轻,肾小球细胞增生减轻,肾间质炎症细胞浸润和基质沉积减少；Masson染色观察A1组小鼠肾小球及肾小管间质可见少量胶原纤维沉积,A2组小鼠肾组织可见肾小球及肾小管间质大量胶原纤维沉积,肾小球硬化和肾间质纤维化；(3)A1组小鼠肾组织p38MAPK、p-p38MAPK、TGF-β1蛋白表达及p-p38MAPK活化程度(p-p38MAPK/p38MAPK)较D1组均明显增强(P<0.01),A2组更加明显,经氟伐他汀干预后B、C组小鼠肾组织以上蛋白表达及p-p38MAPK活化程度显著降低(P<0.05),C组与B组比较降低更为明显(P<0.05);p-p38MAPK活化程度与TGF-β1表达水平呈正相关(r=0.818,P<0.01)；(4)A1组小鼠肾组织p38MAPK、TGF-β1mRNA表达较D1组均明显增强(P<0.01),A2组更加明显,B、c组小鼠肾组织p38MAPK、TGF-β1mRNA的表达显著降低(P<0.05),C组与B组比较其表达降低亦有统计学意义(P<0.05)。
结论：p38MAPK、p-p38MAPK、TGF-β1在正常肾组织中有少量表达,在cGVHD狼疮样肾炎小鼠肾组织中p38MAPK、p-p38MAPK、TGF-β1蛋白及p38MAPK、TGF-β1mRNA表达均显著升高,且p-p38MAPK活化程度与TGF-β1表达水平呈正相关,提示p38MAPK可能通过介导TGF-β1参与cGVHD狼疮样肾炎小鼠的发病及病情进展；氟伐他汀干预后,p38MAPK、p-p38MAPK、TGF-β1表达水平下降,可能是其缓解肾脏纤维化进程的机制之一。