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目的:探讨α7-烟碱型乙酰胆碱受体(nicotinic acetylcholine receptor,nAChR)在人肺腺癌细胞株A549增殖、迁移和凋亡的作用。 方法:蛋白印迹法检测α7亚基型烟碱型乙酰胆碱受体(α7 nicotinic acetylcholinereceptor,α7-nAChR)在不同肺癌细胞株中的表达,筛选出α7-nAChR稳定高表达细胞株,作为α7-nAChR在肺癌细胞增殖、迁移和凋亡的作用研究的细胞株;将对数生长期的A549随机分成如下3组:空白对照组、激动剂(溴化乙酰胆碱)组、拮抗剂(甲基牛扁亭碱)组,加入不同浓度梯度的激动剂、拮抗剂,分别作用A549细胞24、48、72h; MTT筛选出nAChR激动剂和拮抗剂对细胞增殖促进和抑制的最佳浓度和时间点;将对数期A549细胞随机分为3组:(空白对照组、激动剂组、拮抗剂组),MTT筛选出的最佳的浓度作用最佳时间作用A549后,分别用RT-PCR法和免疫荧光法检测α7-nAChR的表达;MTT实验检测各组细胞增殖情况;细胞划痕实验和transwell实验检测各组细胞迁移情况;Tunel检测凋亡情况,蛋白印迹法检测caspase-3、caspase-9、Bax、Bcl-2表达。 结果:A549、SCLC和LA795三种细胞生长曲线提示:48h和72h为对数生长期细胞大量增殖;RT-PCR和Western blotting示人肺腺癌A549株稳定高表达α7-nAChR; MTT示:与对照组相比,10-3mol/Lα7-nAChR拮抗剂作用A549细胞株48h后能够明显抑制细胞的增殖(P<0.01),10-3mol/Lcα7-nAChR激动剂作用A549细胞48h后细胞增殖明显(P<0.01); RT-PCR和免疫荧光示:α7-nAChR在三组均不同程度的表达,与对照组相比,激动剂组α7-nAChR表达稍增强,拮抗剂组α7-nAChR表达者明显减弱;划痕试验示:拮抗剂抑制A549细胞迁移,相反激动剂促进迁移;Transwell试验示:对照组穿膜细胞数为39.3±4.0(SP×200),拮抗剂组穿膜细胞数为25.5±3.8(SP×200),激动剂组穿膜细胞数为68±5.5(SP×200),激动剂组和拮抗剂组分别于对照组比较差异均有显著统计学意义(p<0.01); Tunel示:α7-nAChR拮抗剂组细胞凋亡较对照组多,明显促进细胞的凋亡,α7-nAChR激动剂组与对照组无细胞凋亡;Western blotting检测凋亡相关蛋白示:拮抗剂组促凋亡蛋白caspase-3、caspase-9、Bax的表达较对照组明显增加,而抗凋亡蛋白Bcl-2表达降低。 结论:α7-nAChR与肺腺癌A549细胞增殖、迁移及凋亡密切相关。拮抗剂下调α7-nAChR表达,肺腺癌A549的增殖和迁移明显抑制,凋亡明显增强,且凋亡可能与α7-nAChR拮抗剂激活机体的Bax/Bcl-2和caspase家族有关。