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目的:观察亚低温预处理对体外培养鼠大脑皮质细胞类缺血-再灌注损伤的保护作用;探讨亚低温保护作用与亚低温联合药物预处理保护作用相比较。 方法:取生后24h之内的新生SD乳鼠的脑皮质细胞,体外培养至第三天,用含2.5ug/ml阿糖胞苷培养基换液一次,抑制神经胶质细胞及纤维细胞生长,培养至第七天随机分为五组:A组(实验对照组),B组(谷氨酸损伤组),C组(亚低温预处理组),D组(亚低温联合依达拉奉预处理组),E组(亚低温联合丙泊酚预处理组)。C、D和E组分别予以亚低温、亚低温联合依达拉奉和亚低温联合丙泊酚预处理。24h后B、C、D和E组予以200μmol/L谷氨酸损伤0.5h,所有分组换正常培养基继续培养24h后观察指标。观察指标为HE染色后显微镜下细胞形态变化和透视电镜下细胞器的改变、细胞凋亡率、细胞存活率(MTT法)、乳酸脱氢酶(LDH)漏出率、c-fos蛋白。 结果:1. HE染色后正置显微镜下细胞形态变化:A组大部分细胞形态基本正常,胞浆呈淡红色,核呈蓝色;极少数细胞胞浆呈深红色,核呈蓝黑色,核固缩。B组可见较多细胞胞浆呈深红色,核呈蓝黑色,核固缩,轴突皱缩明显,有的突起断裂,细胞数量明显减少。C、D和E组,均细胞数量减少不明显,细胞基本联成网状;可见少量细胞胞浆呈深红色,核呈蓝黑色,核固缩,呈凋亡状态。2.透射电镜下细胞超微结构的改变:A组神经细胞膜完整,线粒体和粗面内质网结构完好;B组细胞浆内细胞器数量明显减少,线粒体出现严重肿胀、嵴消失,呈空泡样或固缩,粗面内质网严重扩张,核膜局部可见囊样改变、溶解、断裂,染色质浓缩、边聚;C、D和E组病理改变较B组明显减轻。3.细胞凋亡率、细胞存活率(MTT法)、乳酸脱氢酶(LDH)漏出率、c-fos蛋白结果类似:各预处理组与B组比较,差异有非常显著性(P均<0.01);C组与D组比较,差异有统计学意义(P<0.05);C组与E组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。 结论:亚低温预处理对离体大脑皮层神经细胞的谷氨酸损伤有保护作用。亚低温联合丙泊酚预处理组对谷氨酸损伤的大脑皮层神经细胞有更好的保护作用。