光敏色素蛋白的克隆表达和藻红蓝蛋白α亚基的特性分析

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光敏色素(phytochrome)由蛋白质和发色团组成,是一种典型的具有在红光-远红外光区域(R/FR)可逆光致变色效应的光感受器,普遍存在于高等植物、细菌以及蓝藻中。集胞藻PCC6803中就具有类似高等植物光敏色素的细菌光敏色素。通过对集胞藻PCC6803基因编码蛋白的蛋白质结构预测分析后,成功克隆了slr1212和slr2031两基因片段,并获得了相应的蛋白,后期工作将该蛋白与藻胆色素共价耦合,运用各类光谱技术分析,研究光敏色素捕获光能感受光能的特性。藻胆蛋白是一类捕光色素蛋白,藻红蓝蛋白(phycoerythrocyanin,简称PEC)是藻胆蛋白的一种。本文进行了重组藻红蓝蛋白的生物合成条件、色素蛋白稳定性的影响因素和色素肽的稳定性研究。这些研究可作为藻胆蛋白在应用研究的重要补充,具有实际的经济意义。通过分子生物学的方法,将重组藻红蓝蛋白亚基相关的基因转入大肠杆菌中,共表达实现了藻红蓝蛋白亚基的生物合成。其中重组蛋白在温度为28℃,诱导表达时间为14h,诱导剂IPTG量为1.0mmol/L的条件下,表达蛋白含量最高为11.271mg/100mL。研究了温度、pH、光照、离子强度、金属离子和小分子等因素对重组藻红蓝蛋白亚基稳定性的影响。结果表明,重组蛋白在避光条件下,温度低于37℃,pH为4~9能很好保存,紫外照射和多数金属离子对重组蛋白荧光有很强的猝灭作用,在低浓度中性盐和低浓度碳水化合物溶液中,重组蛋白有较好的稳定性。研究了影响重组藻红蓝蛋白α亚基色素肽稳定性因素。实验证明,磷酸缓冲液对色素肽的改变不大,多烷醇类溶剂对色素的性质影响较大,色素肽在甲醇保存时间最长。
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