【摘 要】
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随着我国人口老龄化趋势的加深,前列腺类疾病日益凸显,严重影响中老年人的生活质量,其中良性前列腺增生(BPH)与前列腺癌(PCa)危害甚深。文献研究表明,人体内的睾酮(T)可在5α-还原酶的
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随着我国人口老龄化趋势的加深,前列腺类疾病日益凸显,严重影响中老年人的生活质量,其中良性前列腺增生(BPH)与前列腺癌(PCa)危害甚深。文献研究表明,人体内的睾酮(T)可在5α-还原酶的催化作用下依赖还原性辅酶Ⅱ(NADPH)提供氢离子转化为具有更强生物活性的二氢睾酮(DHT)。DHT在体内的积聚与BPH的产生有着直接联系。在PCa发病初期,阻断雄性激素往往可以使症状得以缓解,但最终肿瘤细胞会朝非雄性激素依赖性转化,导致治疗失效。采用系统溶剂提取车前子、熟地黄、泽泻、川牛膝等中药材,并用硅胶柱层析初步分离提取物,建立了用于筛选5α-还原酶抑制剂与DU145细胞生长抑制剂的天然药物初步分离提取库。对比吸光度检测与荧光检测NADPH的准确度与精确度,选择荧光法建立5α-还原酶抑制剂的体外筛选模型,最终条件为:激发波长360 nm,发射波长465 nm,NADPH 40μM,T 20μM,5α-还原酶提取物5 mg/ml,提取物浓度100μg/ml,非那雄胺(阳性对照)2μM,总体积120μl,37℃反应10 min。经过筛选发现:车前子、熟地黄、泽泻、川牛膝均存在某些对5α-还原酶有一定的抑制作用的提取部位,其中以泽泻的正丁醇提取部位抑制活性最强。通过应用四噻唑蓝(MTT)比色法,对人体前列腺非雄性激素依赖性肿瘤细胞株DU145进行了生长抑制剂的筛选。实验结果表明,车前子正丁醇提取物经硅胶柱层析所得到的第二段收集物中所含物质对DU145细胞生长具有很强的抑制活性,其IC50值为25.02μg/ml。
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