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目的喉癌是耳鼻喉科常见的恶性肿瘤,男性发病率是女性的10倍左右,近几年来喉癌发病有明显增高的趋势,严重威胁人类的生命安全。因此,早期诊断喉癌,预测喉癌的侵袭与转移能力极为重要。与其他肿瘤一样,喉鳞状细胞癌的发生、发展也是一个多基因参与的复杂过程,喉癌的发病机制尚不完全清楚。位于染色体1p36.1的RU NX3基因被认为是一种新近发现的肿瘤抑制基因,RUNX3基因的低表达与多种恶性肿瘤的发生发展有着密切关系,RUNX3基因是TGF-β传导通路的一个重要环节,参与TGF-β的上皮细胞生长的负调控。DNA甲基化可能是RUNX3基因失活的重要机制,甲基化和等位基因缺失共同引起RUNX3基因的失活,促进了肿瘤的发生发展。现针对胃癌肿瘤组织及其癌旁组织RUNX3基因甲基化状态研究,了解到RUNX3基因甲基化可能成为胃癌早期诊断的分子标记物。研究表明,在食管磷癌、肺癌、肝细胞癌、结直肠癌等存在RUNX3基因表达的缺失或下调,但对于喉癌RUNX3基因甲基化的研究还尚无报道,本研究拟通过应用甲基化特异性PCR技术对喉癌组织甲基化状态进行检测。进一步探讨RUNX3基因启动子区甲基化异常与喉鳞状细胞癌发生发展的相关性,以便为喉癌的早期诊断和治疗探索新的途径。方法标本40例喉癌组织标本间断取自我院2005-2008年的手术切除标本,立即放液氮中速冻,-80℃冻存备用。同时选取距离肿瘤组织1cm以上的癌旁组织作为对照。年龄34-79岁,平均年龄60岁,男36例,女4例,有淋巴结转移12例。所有标本术后均经病理证实。采用逆转录-多聚合酶链反应(Reverse transcription-PCR)及甲基化特异性PCR(Methylation specific PCR,MSP)方法检测40例喉癌及其癌旁1cm粘膜组织RUNX3启动子基因甲基化状态及其mRNA的表达。采用SPSS13.0统计软件行统计分析,计量资料实验数据结果用均数土标准差(X±S)表示,样本均数比较采用方差分析,样本率比较用F检验、卡方检验或Fisher’s精确概率法。结果在40例喉癌组织标本中,Runx3基因mRNA表达的平均灰度值为1.6215±1.00640,低于在癌旁正常组织中Runx3基因的表达的平均灰度值5.6617+2.07458,差异有统计学意义(p＜0.05)。喉癌组织标本中Runx3基因mRNA表达的下降与病理的分化程度有关,在喉癌组织标本中,低分化组的Runx3基因mRNA表达的平均灰度值为0.7733±0.64691,低于中-高分化组的Runx3基因mRNA表达的平均灰度值2.3155±0.64892,差异有统计学意义(p＜0.05)。喉癌组织标本中Runx3基因mRNA表达的下降与淋巴结转移有关,在喉癌组织标本中,有淋巴结转移组的Runx3基因mRNA表达的平均灰度值为0.6242±0.80444,低于无淋巴结转移组的Runx3基因mRNA表达的平均灰度值2.0489±0.7535,差异有统计学意义(p＜0.05)。癌旁组织与喉癌组织甲基化的结果,癌旁组织中未发现有Runx3基因启动子的甲基化,40例喉癌组织中有38例检测到Runx3基因启动子的甲基化,所以喉癌组织Rmx3基因启动子的甲基化率高于癌旁组织,差异有统计学意义(p＜0.05)。结论1、喉鳞状细胞癌中Runx3基因启动子甲基化是导致Runx3基因失活的主要原因之一。Runx3基因启动子转录起始点部位可能为Runx3基因甲基化的关键位点。2、喉鳞状细胞癌中Runx3基因mRNA的表达的下调与喉癌的病理性低分化有关。3、喉鳞状细胞癌中Runx3基因mRNA的表达的下调与淋巴结转移有关。