拟南芥功能未知基因AtCS25的初步研究

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拟南芥作为经典的模式植物,是第一个完成全基因组测序的高等植物,随着研究的不断深入,越来越多的基因的功能被人们所了解,但是仍然有大量的功能未知的基因等待我们去探究。随着生物信息学,反向遗传学和现代分子生物学技术的不断进步,这些功能未知基因的定位,功能以及对于它们的表达与调控的研究,引起了人们极大的兴趣。本试验从油菜种子不同发育时期的2个抑制消减杂交库和cDNA文库中分离了1个三个库中共有的功能未知的基因,命名为BnaCS25.通过生物信息学分析,在拟南芥中找到其同源基因命名为AtCS25,其功能也是未知的,推测其可能与花粉的发育和细胞壁发育有关。本试验通过分子生物学,生物信息学的方法对AtCS25基因进行了初步的研究,主要研究成果如下:1、通过生物信息学分析发现,该基因是植物特有基因,位于拟南芥2号染色体上,包含2个外显子和2个内含子,基因全长为752bp,所编码的蛋白质由184个氨基酸组成,分子量大小约为19kD。该基因编码的蛋白包含一个花粉过敏原蛋白结构域PollenOlee1/extensin,存在跨膜结构,并且很可能为一种分泌蛋白。2、通过RT-PCR方法,对AtCS25基因的表达谱进行了分析,结果显示该基因在拟南芥早期发育时期有较高的表达,而在成熟的植株中该基因只在根中表达。3、成功克隆了AtCS25基因,并构建了AtCS25基因的过表达载体pBI121-AtCS25和干扰载体pGSA1285-AtCS25.4、通过农杆菌介导方法,将构建好的过表达载体通过浸花法转入到野生型拟南芥Col中,获得了35株转基因植株。并通过RT-PCR对转基因植株进行了AtCS25基因表达的检测,结果显示该基因得到了过量表达。
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