本研究以家禽免疫抑制性疾病为研究对象,以建立快速、灵敏、准确、简便、实用、高通量的检测方法为目标,建立了家禽免疫抑制性疾病多重通用扩增鉴别诊断（General multiplex RT-PCR integrated with luminex,GMPLex）检测方法。本论文主要研究内容如下:按照国家标准采用HA（Hemagglutination）、HI（Hemagglutination ingibition）和real time RT-PCR（real time reversetranscriptionpolymerase chain reaction）三种方法对10株深圳出入境检验检疫局保存的不同年代的家禽免疫抑制性病毒毒株进行了确证。通过HA和HI试验确定A/Chicken/Hongkong/SZ-HI/1997（H5N1）毒株和NDV-F48E9毒株对鸡胚的特异性死亡数量,根据Reed-Muench算法计算出A/C hicken/Hongkong/SZ-HI/1997（H5N1）毒株的鸡胚半数致死量ELD₅₀为10^-7.75/0.2mL,NDV-F48E9毒株的鸡胚半数致死量ELD₅₀为10^-8.5/0.2mL。设计了针对禽流感病毒的M基因（AIV-M）、新城疫病毒的F基因（NDV-F）、传染性法氏囊病毒的VP2基因（IBDV-VP2）、马立克氏病毒1型的PP38基因（MDV-PP38）、J型禽白血病病毒的ENV基因（ALV-J-ENV）、鸡传染性贫血病毒的VP2（CAV-VP2）的特异性鉴别诊断引物和探针,引入通用超级引物,创建了一个全新的通用多重RT-PCR检测方法,实现了对家禽免疫抑制性病毒多个亚型的目标片段一次多重RT-PCR扩增目的,解决芯片检测过程中需要多次PCR扩增的瓶颈。将通用多重RT-PCR检测方法与液相芯片高通量检测方法结合,建立起家禽免疫抑制性疾病多重通用扩增鉴别诊断GMPLex检测方法。所建GMPLex检测方法检测通量高,可一次对六种家禽免疫抑制性病毒的六个目的基因进行鉴别诊断;方法快速,家禽免疫抑制性病毒鉴别诊断检测可在6h内完成;特异性强,通过两套套式引物和一个特异性探针来确保每个亚型的特异性,病毒各个亚型毒株相互之间没有发现交叉反应,与其他病原体之间也无非特异性反应;灵敏度高,GMPLex法检测出H5病毒的检测灵敏度为病毒尿囊液稀释至10^-5(相当于280 ELD₅₀),检测出新城疫毒株的检测灵敏度为病毒尿囊液稀释至10^-5(相当于280 ELD₅₀)。GMPLex快速高通量检测方法检测三个RNA毒株检测灵敏度为病毒尿囊液稀释至10^-4(相当于2800 ELD₅₀)。采用所建立的家禽免疫抑制性疾病多重通用扩增鉴别诊断GMPLex检测方法对实验室保存的160株禽病病毒株进行小样本检测,检测结果与经典检测方法结果一致。证明所建立的GMPLex快速高通量鉴别诊断检测方法能够满足口岸家禽免疫抑制性病毒检测快速高通量的要求,为搭建家禽免疫抑制性病毒快速高通量的检测平台打下良好基础。