1.恒河猴川西亚种生物学特性背景数据建立[目的]利用国家科技基础条件平台项目建立“国家实验恒河猴川西亚种种源基地”中2000只恒河猴川西亚种种群,开展该品系动物生物学特性背景数据研究。[结呆](1)生长特性研究结果表明0-3.5岁恒河猴川西亚种体重和身长均显著小于匡内已报道恒河猴数据,且与0-3.5岁食蟹猴体重数据相似。恒河猴川西亚种可能具有小型化特点。(2)建立了2.5-5岁(雌雄兼有)年龄段400只健康恒河猴川西亚种血液生化、血凝各指标正常参考值。分析野外引种、适应性饲养30天、标准化饲养1年、标准化饲养2年和驯化成功对血清生化各指标影响,结果表明标准化人工饲养和驯化程度对实验数据影响非常大,是实验过程中必须考虑控制环节。与人正常生理域值范围比较,ALT、AST、ALP、GGT、BUN、GLU、CK各项指标数据随着人工驯养时间增加,数据波动范围逐渐减低,并接近人正常生理域值；驯化成功条件下的血清生化、血凝各项指标最接近人的正常生理域值。[结论]以上结果为恒河猴川西亚种应用于新药安全性评估和疚病模型动物研究提供了重要基础数据。2.恒河猴川西亚种静脉注射美他卡韦3月长期毒性研究[目的]美他卡韦(Metacavir)是一类新型双脱氧鸟嘌呤类抗乙肝药物,为评价其安全性开展静脉重复给予恒河猴川西亚种3月毒性试验。[方法]恒河猴随机分为美他卡韦120mg/kg、40mg/kg、13mg/kg组,生理盐水对照组,6只/每组,连续iv给药3月,观测动物一般症状、心电图、尿液、血液学、血清生化、T细胞亚群CD3及CD4+/CD8比例、血清IgG滴度、血清IFN-r、骨髓等指标。[结果]对动物体重、体温、眼底检查、心电图影响不具有生物学上改变的意义。主要毒性反应为：美他卡韦120mg/kg组出现明显胃肠毒性,给药早期动物恶心、呕吐、摄食量下降,但以上不良反应逐渐减轻。血液系统造成损伤,血红蛋白含量降低,骨髓红细胞系统代偿性增加、伴网织红细胞数增多,表现为贫血。肝功能有一定的损伤,影响蛋白特别是白蛋白生成,造成总蛋白、白蛋白降低,提示临床试验应注意血象和血液生化指标改变,特别要注意血红蛋白含量和白蛋白水平的变化。未见与美他卡韦有相关免疫毒性反应。对动物血清总IgG、IFN-r水平影响较小;能引起外周血T淋巴细胞亚群CD3+、CD3+/CD4+细胞、CD3+/CD8+细胞比例不同程度的升高,给药未引起各给药组的CD4+和CD8+细胞比例显著变化,但停药后以上改变是可复性的。对外周血淋巴细胞不具有免疫刺激作用。停药4周结果表明损伤可修复,毒性反应是可逆性。[结论]在本实验系统下,美他卡韦毒性反应的靶器官主要在消化道、肝脏、血液,其对恒河猴的安全剂‘量为13mg/kg。3.采用HepG2(?)田胞模型研究美他卡韦线粒体毒性,验证实验猴模型敏感性。[目的]采用HepG2细胞模型方法评价药物对机体肝组织潜在的线粒体毒性,为临床设计人用剂量和主要观察指标提供参考。[方法]美他卡韦高浓度250μM、中浓度50μM、低浓度10μM,7倍临床Cmax(50μM))齐多夫定(AZT),746倍临床Cmax (50μM)阿德福韦酯(ADV)作用HepG2细胞9天,测定细胞毒性,培养液中乳酸盐含量,线粒体呼吸链复合体活性变化,透射电镜观察线粒体形态结构,采用QPCR技术对线粒体DNA(细胞色素b基因)和核DNA (Actin基因)定量,以cytochrome b/actin比率评价对线粒体mtDNA含量和损伤影响标准。[结果]齐多夫定50μM作用HepG2细胞9天的细胞抑制率约55%,培养上清中乳酸含量显著升高,线粒体结构破坏严重、肿胀、部分嵴消失而形成空泡;显著降低线粒体呼吸链复合体蛋白达60%生右,mtDNA含量极显著降低70%以上。阿德福韦酯50μM作用HepG2细胞9天的细胞抑制率约30%,乳酸含量显著升高,线粒体结构较完整、仅见嵴较稀,对线粒体呼吸链复合体蛋白活性呈现轻度增加趋势,mtDNA含量有降低趋势。美他卡韦高浓度250μM作用HepG2细胞9天,细胞抑制率约48%,乳酸含量显著升高,线粒体结构较完整,仅见嵴较稀；对线粒体呼吸链复合体蛋白活性和mtDNA含量有一定降低。美他卡韦50μM、10μM浓度下作用HepG2细胞9天的细胞抑制率分别为20%和10%,乳酸含量未见明显增加,线粒体结构完整而未见明显损伤表征,对线粒体呼吸链复合体蛋白活性和mtDNA含量影响较小。[结论]作用HepG2细胞9天,齐多夫定(AZT)在7倍临床Cmax(50μM)浓度下对线粒体存在严重损伤,美他卡韦250μM和阿德福韦酯(ADV)746倍临床Cmax(50μM)浓度下表现出一定线粒体损伤,而美他卡韦50μM和10μM浓度下对机体肝组织潜在线粒体毒较弱。4.恒河猴川西亚种(M. m lasiotis)2型糖尿病临床特征与人T2DM比较研究。[目的]通过改变恒河猴川西亚种(M. m lasiotis)饮食习惯24月,研究该品系动物在糖耐量损伤(IGT)、空腹血糖受损(IFG)、显性2型糖尿病(T2DM)阶段相关临床参数变化特征与人T2DM相似性,建立恒河猴川西亚种T2DM分类诊断标准。[方法]选用雄性、空腹血糖(FPG)≤5mmol/l的60只恒河猴川西亚种,其中50只(年龄7-20岁)采食含8%脂肪的猴高脂饲料24月,10只(年龄4-10岁)喂食含3%脂肪的猴标准饲料24月,定期观察体重、体重指数(BMI)、空腹血糖(FPG)、空腹血浆胰岛素(FPI)水平、糖化血红蛋白(HbAlc)水平,静脉注射葡萄糖耐受试验研究糖耐量损伤(IGT)和分析餐后胰岛素分泌敏感性,采用WH02006丰人糖尿病诊断标准分析数据。[结果]50只猴采食含8%脂肪饲料24月,8只发展成显性糖尿病,26只猴表现为糖耐量损伤或空腹血糖受损,16只猴表现为空服血糖水平正常；10只喂食含3%脂肪的猴标准饲料24月,空服血糖水平正常。恒河猴川西亚种糖耐量损伤(IGT)和2型糖尿病发病早期阶段特征表现为肥胖,FPI代偿性增加,餐后葡萄糖清除速度(KGluc5-20)显著降低,餐后胰岛素分泌敏感性下降,第一时相胰岛素分泌减少,第二时相胰岛素分泌延迟；HbAlc随着血糖水平增加而上升；慢性高血糖晚期猴表现为瘦弱、多尿多饮,空腹血糖(FPG)可大于10mmol/l,HbAl c水平可达8.9%,FPI显著降低,餐后半小时胰岛素分泌增加后迅速降低。HbAlc在4.5-5%之间有发展成2型糖尿病的高风险可能。[结论]恒河猴川西亚种(M.mlasiotis在IGT、IFG和2型糖尿病阶段的临床表征和发病相关危险因素与人T2DM非常相似,可成为研究2型糖尿病潜在新疗法中非常好的疾病动物模型。