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大肠杆菌0157：H7是肠出血性大肠杆菌(EHEC)的主要血清型,能够导致腹泻、出血性结肠炎、溶血性尿毒综合症和血栓形成的血小板减少性紫癜等病症,该菌的流行暴发大多与食用被该菌污染的食物有关,因此建立快速、简单、灵敏度高和特异性强的检测方法对于该菌的防控具有重要意义。本文建立了免疫磁珠分离富集和胶体金免疫层析试纸条相结合的方法,用于大肠杆菌0157：H7的快速检测。本研究以0.3%甲醛灭活的大肠杆菌0157：H7菌体作为免疫原制备了两组兔多抗,间接ELISA测得纯化后的效价分别为1/6.4×105和1/1.28×106；以酸洗脱法提取的鞭毛蛋白免疫Balb/c小鼠制备单抗,获得了3株稳定分泌特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞株(10C5-H3-B6、8C2和8B1-C2-B1),其制备的腹水纯化后效价分别为1/6.4×106、1/1.6×104和1/1.28×105, Western-blots结果显示单抗10C5-H3-B6针对的抗原表位为菌体脂多糖(LPS),单抗8C2针对的抗原表位为鞭毛蛋白。本研究采用EDC/NHSS化学偶联法制备免疫磁珠,对免疫磁珠进行了表征,按实际捕获效果来确定免疫磁珠制备工艺,对免疫磁珠添加量、孵育时间、分离时间等进行了优化,评价了其特异性及在食品基质样品中的捕获效果。结果显示：单抗10C5-H3-B6免疫磁珠捕获率为99.9%,偶联时抗体加入量为50μg/mg;经试验优化,确定在1mL体系中免疫磁珠加入量为0.05mg,室温孵育时间为30min,磁分离时间为3min。该免疫磁珠特异性良好,在牛肉和牛奶基质中的捕获率分别为94.4%和99.8%,而商品化的Dynabeads anti-0157免疫磁珠在牛肉馅和牛奶基质中的捕获率分别为72.8%和95.8%。采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金溶液,胶体金标记单抗10C5-H3-B6后喷于金标垫上,NC膜上依次喷2号兔多抗和驴抗鼠多抗作为检测线和质控线,研制了大肠杆菌0157：H7胶体金快速检测试纸条,以此为基础建立了胶体金免疫层析试纸条相结合的检测方法,并对该方法进行了评价。采用胶体金试纸条读取仪读取试纸条上T线和C线的光密度值,以菌浓度的对数值为横坐标,T/C比值为纵坐标绘制标准曲线。结果表明：制备的胶体金检测卡灵敏度较高、特异性好,通过与免疫磁珠富集方法联用,检测灵敏度达到7.6×103CFU/mL,比直接滴加于检测卡提高了一个数量级。该试纸条加样20min后,T/C数值趋于稳定,试纸条检测3组不同浓度菌液的T/C值变异系数分别为7.4%、7.6%和10.4%(n=18),绘制的标准曲线相关系数R2为0.987。