【摘 要】
：
目的:通过建立骨质疏松小鼠动物模型,体外构建β-catenin基因过表达及沉默慢病毒载体,并感染骨质疏松小鼠脂肪干细胞,分别上调和下调β-catenin表达水平,探讨经典Wnt/β-cate
论文部分内容阅读
目的:通过建立骨质疏松小鼠动物模型,体外构建β-catenin基因过表达及沉默慢病毒载体,并感染骨质疏松小鼠脂肪干细胞,分别上调和下调β-catenin表达水平,探讨经典Wnt/β-catenin信号通路在骨质疏松小鼠脂肪干细胞成骨分化中的作用及机制。方法:将8周龄雌性C57BL/6小鼠(体重约20g)按随机原则分为两组:对照组(假手术组)和实验组(去势组)。实验组采取手术方式切除双侧卵巢,对照组切除等量脂肪不切除卵巢,术后6周,分别截取两组小鼠右侧股骨行Micro-CT对骨量变化进行检测,同时利用HE染色、Masson染色检测其骨小梁变化。成功建立骨质疏松小鼠动物模型后,麻醉处死实验组和对照组小鼠,分别从两组小鼠腹股沟处获得脂肪,组织块法培养原代脂肪干细胞,纯化扩增传至第3代。通过流式细胞术(Flow cytometry,FCM)检测其间充质细胞表面抗原,成骨、成脂诱导7天后行免疫荧光染色检测Runt相关转录因子2(RUNX2)、骨桥蛋白(OPN)、CCAAT/增强子结合蛋白(C/EBPα)、过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ);成骨、成脂诱导21天后分别行茜素红染色和油红O染色,验证其具有多向分化能力。构建β-catenin基因过表达和沉默慢病毒载体,测定去势组脂肪干细胞(OP-ASCs)的最适MOI,以最适MOI感染OP-ASCs,96h后免疫荧光观察感染效率,嘌呤霉素筛选出稳定感染目的基因的细胞运用实时荧光定量PCR技术(Real-time PCR)及蛋白免疫印迹技术(Western blot)检测β-catenin/β-CATENIN的表达情况。将稳定感染的细胞进行成骨诱导3、5、10天,在第3天和第5天分别采用Real-time PCR和Western blot检测β-catenin/β-CATENIN,Runx2/RUNX2,Opn/OPN等的表达情况,在第10天进行茜素红染色。结果:1.实验组小鼠与对照组小鼠相比股骨骨小梁明显减少,正常结构消失,排列紊乱,骨髓腔增大,成功建立骨质疏松小鼠动物模型;2.获取的OP-ASCs经流式检测无单核细胞或造血细胞等其他细胞,免疫荧光染色RUNX2、OPN、C/EBPα和PPARγ染色阳性,能成功诱导出矿化结节及脂滴;3.成功构建β-catenin过表达及沉默慢病毒载体,确定感染OP-ASCs的最适MOI均为80,能稳定感染OP-ASCs,Real-time PCR及Western blot验证目的基因:过表达组β-catenin表达上调,沉默组β-catenin表达下调;4.在成骨诱导条件下,Real-time PCR、Western blot及茜素红染色结果表明过表达组较对照组和沉默组在β-catenin/β-CATENIN、Runx2/RUNX2、Opn/OPN表达水平、矿化结节生成均明显增高,对照组检测指标次之,沉默组检测指标均最低。结论:1.通过去势法成功构建骨质疏松小鼠动物模型。2.利用组织块法成功分离培养出骨质疏松小鼠脂肪干细胞。3.成功构建β-catenin过表达及沉默慢病毒载体,能够稳定感染OP-ASCs,成功上调和下调Wnt/β-catenin信号水平。4.过表达组Wnt/β-catenin信号水平上调OP-ASCs成骨向分化能力增强,而沉默组Wnt/β-catenin信号水平下调其成骨向分化能力减弱。
其他文献
教育供求问题已经成为制约我国教育发展的主要矛盾,即使村办小学教育也不例外。虽然我国现在已基本普及九年制义务教育,但是,对于少数贫困地区和特殊群体教育供给数量仍然不能满足教育需求;所以,我们应该清醒地认识到村办小学教育发展面临的困难和问题,教育投入与义务教育发展的客观需要严重不足,村办小学教育发展不平衡的问题突出,城乡、地区之间义务教育的办学条件、教育质量差距巨大,等等。这些问题归结到底就是义务教育
与交流电网相比,柔性直流电网不存在无功补偿、频率抖动等问题,能够将大规模远距离新能源便捷接入,实现与传统能源的互联,是未来电网发展的重点方向。不同的直流电压等级之间需要依靠DC/DC变换器连接,DC/DC变换器是构建直流电网的关键设备。本文主要围绕面向柔性直流电网的DC/DC变换器及其故障限流能力的关键技术开展研究。首先对柔性直流电网的背景进行阐述,引出研究适用于直流电网DC/DC变换器的目的和意
第一部分骨质疏松小鼠模型的构建及鉴定目的:成功构建骨质疏松(Osteoporosis,OP)小鼠动物模型。方法:将30只10周龄C57BL/6雌性小鼠进行随机分组,分为去势组和对照组两个组别
倒伏不仅会减少产量,降低品质,引发病虫害,还会影响机械化收割。大量研究表明,增加种植密度是世界玉米大面积高产的重要措施之一。因此,在高密度条件下研究玉米抗倒伏遗传机
无论是在病毒还是在细胞中,DNA分子皆以紧密压缩态存在。实验表明,在受限条件下,大分子排空效应能进一步促进DNA凝聚,而且DNA凝聚过程与排空粒子直径有关;同时,温度对DNA凝聚也有显著的影响,温度的升高会促进DNA凝聚,随着温度的升高,DNA凝聚得更加紧凑。但在受限条件下大分子排空效应促进DNA凝聚过程影响及温度对DNA凝聚促进作用的机制均有待于进一步研究。鉴于此,本文运用蒙特卡罗模拟方法,开展
近年来,随着我国国民经济和国际综合实力的增强,社会分工越来越细化,提高成本管理已成为提高制造企业利润的重要途径。通过把精准和细化的管理融入成本管理中,不仅能够促使成本管理方式的更新,而且通过管理方式的提升,使企业能够随时调整并适应外部环境的变化。S紧固件深圳公司逐步形成了生产、研发和销售一体化的经营格局,成本管理对该企业竞争力的大小有着直接的影响,实施精准和细化的成本管理已经刻不容缓。本文借鉴了国
随着大气颗粒物污染问题的不断升温,现有的常规除尘器对细颗粒物的脱除效率过低,不能满足愈加严苛的环保要求。为了提高对细颗粒物的脱除效率,学者提出了烟气预处理技术。声
锂硫电池具有1675 m Ah g-1的理论比容量和2600 Wh kg-1的能量密度,远高于商用锂离子电池。此外,硫作为正极活性材料,贮藏丰富,且低价,环保易开采,有望成为未来新型储能体系。然而,该领域在商用之前仍有许多问题亟待处理:首先正极活性材料S_8及其放电产物Li_2S的导电性较差,且中间产物在充放电过程中易溶于电解液,从而导致“穿梭效应”等。此外,S_8与Li_2S之间密度差异较大,多
随着我国海洋装备技术的不断发展,水下无人航行器(Unmanned Underwater Vehicle,UUV)已然成为海洋资源探测利用中一股不可替代的力量。对于UUV来说,保证其能顺利完成任务的首
钢筋灌浆套筒连接作为装配式结构的重要连接方式,具有良好的受力和抗震性能。国内市场已有的球墨铸铁套筒的技术研究较为成熟,但造价高的缺点也制约了它的推广应用。而新型套筒由无缝钢管冷轧而成,制作简便,造价较低。但相关研究较少,特别是还没有涉及到用于大直径钢筋的套筒连接性能的研究。本文通过试验和数值分析的方法,针对应用于32mm大直径钢筋的冷轧灌浆套筒开展研究分析其受力机理,对套筒构造形式进行了优化设计。