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目的:探讨阿魏酸钠(SF)对缺氧缺血损伤神经元的保护作用，以及在此过程中miR-9、乙酰胆碱酯酶(AchE)和突触后致密物质-95(PSD-95)的变化与关系。
方法:细胞实验:培养的PC12细胞分为对照组（C组）、缺氧缺血组（HI组）、阿魏酸钠干预组（HI+SF组）和miR-9抑制剂LNA-miR-9干预组（HI+LNA组）。C组正常培养32h;HI组通过低血清-氧剥夺诱导PC12细胞缺氧缺血损伤32h建立缺氧缺血损伤细胞模型，SF组和HI+LNA组在低血清-氧剥夺8h后分别添加SF和LNA-miR-9，其余同HI组。观察各组细胞生长情况，并采用RT-PCR检测miR-9、AchE mRNA和PSD-95mRNA表达水平;采用Western blot检测AchE和PSD-95蛋白表达水平。动物实验:选用7日龄SD大鼠180只，随机分为对照组（C组）、假手术组（Sham组）、缺氧缺血性脑损伤组(HIBD组)、阿魏酸钠治疗组(HIBD+SF组)、LNA-miR-9干预组（HIBD+LNA组）和PBS对照组（HIBD+PBS组）6个组，每组30只。HIBD组、HIBD+SF组、HIBD+LNA组和HIBD+PBS组采用改良的Rice-Vinnacci法，双线结扎左颈总动脉并离断，放置于35℃，8％O2浓度的三气培养箱中缺氧2h，建立HIBD动物模型;Sham组只分离左颈总动脉不结扎，不缺氧;对照组正常饲养，不处理。在大鼠21日龄时，HIBD+SF组通过腹腔注射SF溶液(SF溶解于生理盐水中，浓度为7mg/ml)50mg/kg，每天一次，连续5d;HIBD+LNA组及HIBD+PBS组通过脑立体定位技术向侧脑室分别注射LNA-miR-9(浓度为200μM)2μl和PBS缓冲液2μl。在26日龄时，每组随机选12只大鼠处死，冰上剥离左侧海马组织并液氮冻存，采用RT-PCR检测其miR-9、AchE mRNA和PSD-95mRNA表达水平;采用Westernblot检测其AchE和PSD-95蛋白含量;每组再随机选取6只大鼠麻醉后用4％多聚甲醛溶液灌注固定，取脑组织作常规石蜡切片、HE染色观察海马齿状回(DG)神经细胞形态、数量变化。30日龄时各组剩余大鼠进行Morris水迷宫训练，每天4次，连续5d，35日龄进行探查试验检测各组大鼠的学习记忆能力。
结果:细胞实验中，C组PC12细胞形态正常，细胞突起明显，贴壁牢固;与C组相比，HI组PC12细胞变圆，细胞突起减少，贴壁不牢;而HI+SF和HI+LNA组与HI组相比，细胞突起明显增加，贴壁牢固。RT-PCR和Western blot实验显示:与C组相比，HI组细胞的miR-9、AchE mRNA及其蛋白表达增加（P＜0.05），而PSD-95mRNA及其蛋白表达降低（P＜0.05）;与HI组相比，HI+SF组和HI+LNA组细胞的miR-9、AchE mRNA及其蛋白表达明显降低（P＜0.05），而PSD-95mRNA及其蛋白表达增加(P＜0.05)。
动物实验中，HE染色可见:C组和Sham组大鼠左右大脑半球形态、结构对称、海马DG神经元排列整齐;与Sham组相比，HIBD组和HIBD+PBS组大鼠大脑切片左侧半球较右侧半球缩小，海马面积减小（P＜0.05），海马DG形态改变，神经元排列紊乱、数量减少;而HIBD+SF组和HIBD+LNA组分别与HIBD组和HIBD+PBS组相比，海马面积均增加(P＜0.05)，DG的神经细胞数目均明显增多、排列紧密有序。Morris水迷宫实验发现:C组和Sham组在定位航行训练中逃避潜伏期时间(T)短，探查试验中在目标象限的探查路程(P)较长;与Sham组相比，HIBD组和HIBD+PBS组大鼠的T值均增大（P＜0.05）、P值均减小(P＜0.05);而HIBD+SF组和HIBD+LNA组分别与HIBD组和HIBD+PBS组相比，T值均减小(P＜0.05)、P值均增大(P＜0.05)。海马组织RT-PCR和Western blot实验显示:C组和Sham组的miR-9、AchE mRNA及其蛋白、PSD-95mRNA及其蛋白表达均无显著性差异，与Sham组相比，HIBD组和HIBD+PBS组大鼠海马组织的miR-9、AchE mRNA及其蛋白表达增加（P＜0.05），而PSD-95mRNA及其蛋白表达降低(P＜0.05);而HIBD+SF组和HIBD+LNA组分别与HIBD组和HIBD+PBS组相比，其大鼠海马组织的miR-9、AchE mRNA及其蛋白表达降低(P＜0.05)，而PSD-95mRNA及其蛋白表达增加(P＜0.05)。
结论:SF对缺氧缺血损伤神经元具有保护作用，并可改善缺氧缺血性脑损伤大鼠的学习记忆能力;其机制可能与SF降低（海马）神经元miR-9的表达，进而降低AchE表达、增加PSD-95表达有关。
方法:细胞实验:培养的PC12细胞分为对照组（C组）、缺氧缺血组（HI组）、阿魏酸钠干预组（HI+SF组）和miR-9抑制剂LNA-miR-9干预组（HI+LNA组）。C组正常培养32h;HI组通过低血清-氧剥夺诱导PC12细胞缺氧缺血损伤32h建立缺氧缺血损伤细胞模型，SF组和HI+LNA组在低血清-氧剥夺8h后分别添加SF和LNA-miR-9，其余同HI组。观察各组细胞生长情况，并采用RT-PCR检测miR-9、AchE mRNA和PSD-95mRNA表达水平;采用Western blot检测AchE和PSD-95蛋白表达水平。动物实验:选用7日龄SD大鼠180只，随机分为对照组（C组）、假手术组（Sham组）、缺氧缺血性脑损伤组(HIBD组)、阿魏酸钠治疗组(HIBD+SF组)、LNA-miR-9干预组（HIBD+LNA组）和PBS对照组（HIBD+PBS组）6个组，每组30只。HIBD组、HIBD+SF组、HIBD+LNA组和HIBD+PBS组采用改良的Rice-Vinnacci法，双线结扎左颈总动脉并离断，放置于35℃，8％O2浓度的三气培养箱中缺氧2h，建立HIBD动物模型;Sham组只分离左颈总动脉不结扎，不缺氧;对照组正常饲养，不处理。在大鼠21日龄时，HIBD+SF组通过腹腔注射SF溶液(SF溶解于生理盐水中，浓度为7mg/ml)50mg/kg，每天一次，连续5d;HIBD+LNA组及HIBD+PBS组通过脑立体定位技术向侧脑室分别注射LNA-miR-9(浓度为200μM)2μl和PBS缓冲液2μl。在26日龄时，每组随机选12只大鼠处死，冰上剥离左侧海马组织并液氮冻存，采用RT-PCR检测其miR-9、AchE mRNA和PSD-95mRNA表达水平;采用Westernblot检测其AchE和PSD-95蛋白含量;每组再随机选取6只大鼠麻醉后用4％多聚甲醛溶液灌注固定，取脑组织作常规石蜡切片、HE染色观察海马齿状回(DG)神经细胞形态、数量变化。30日龄时各组剩余大鼠进行Morris水迷宫训练，每天4次，连续5d，35日龄进行探查试验检测各组大鼠的学习记忆能力。
结果:细胞实验中，C组PC12细胞形态正常，细胞突起明显，贴壁牢固;与C组相比，HI组PC12细胞变圆，细胞突起减少，贴壁不牢;而HI+SF和HI+LNA组与HI组相比，细胞突起明显增加，贴壁牢固。RT-PCR和Western blot实验显示:与C组相比，HI组细胞的miR-9、AchE mRNA及其蛋白表达增加（P＜0.05），而PSD-95mRNA及其蛋白表达降低（P＜0.05）;与HI组相比，HI+SF组和HI+LNA组细胞的miR-9、AchE mRNA及其蛋白表达明显降低（P＜0.05），而PSD-95mRNA及其蛋白表达增加(P＜0.05)。
动物实验中，HE染色可见:C组和Sham组大鼠左右大脑半球形态、结构对称、海马DG神经元排列整齐;与Sham组相比，HIBD组和HIBD+PBS组大鼠大脑切片左侧半球较右侧半球缩小，海马面积减小（P＜0.05），海马DG形态改变，神经元排列紊乱、数量减少;而HIBD+SF组和HIBD+LNA组分别与HIBD组和HIBD+PBS组相比，海马面积均增加(P＜0.05)，DG的神经细胞数目均明显增多、排列紧密有序。Morris水迷宫实验发现:C组和Sham组在定位航行训练中逃避潜伏期时间(T)短，探查试验中在目标象限的探查路程(P)较长;与Sham组相比，HIBD组和HIBD+PBS组大鼠的T值均增大（P＜0.05）、P值均减小(P＜0.05);而HIBD+SF组和HIBD+LNA组分别与HIBD组和HIBD+PBS组相比，T值均减小(P＜0.05)、P值均增大(P＜0.05)。海马组织RT-PCR和Western blot实验显示:C组和Sham组的miR-9、AchE mRNA及其蛋白、PSD-95mRNA及其蛋白表达均无显著性差异，与Sham组相比，HIBD组和HIBD+PBS组大鼠海马组织的miR-9、AchE mRNA及其蛋白表达增加（P＜0.05），而PSD-95mRNA及其蛋白表达降低(P＜0.05);而HIBD+SF组和HIBD+LNA组分别与HIBD组和HIBD+PBS组相比，其大鼠海马组织的miR-9、AchE mRNA及其蛋白表达降低(P＜0.05)，而PSD-95mRNA及其蛋白表达增加(P＜0.05)。
结论:SF对缺氧缺血损伤神经元具有保护作用，并可改善缺氧缺血性脑损伤大鼠的学习记忆能力;其机制可能与SF降低（海马）神经元miR-9的表达，进而降低AchE表达、增加PSD-95表达有关。