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目的：
强直性脊柱炎（ankylosing spondylitis，AS）是一种慢性风湿性的炎症疾病，其特点是侵犯轴性关节部位，如脊柱和骶髂关节，好发于20-30岁的青年，以男性患者为主。AS疾病常常伴随着炎症的局部骨化过程，导致病理学上的脊柱强直和椎间盘周围的纤维及韧带钙化，易发生脊柱的强直以及关节的畸形，但其根本的发病机制目前还不清楚。
近来研究发现，如T淋巴细胞、巨噬细胞等免疫细胞及其产生的细胞因子IL-2、TNF-α、IL-17和趋化因子CCL2、CXCL8、CXCL9等均可能参与了AS疾病的发生发展。其中CXCL16是一种由防御性免疫细胞产生并可发挥多种生物学作用的趋化因子，在多种炎症性疾病以及肿瘤中高表达，参与炎症浸润、肿瘤细胞增殖等。但目前对于CXCL16/CXCR6是否在AS疾病的病理生理过程发挥作用，以及对AS疾病中免疫细胞的调控机制尚不清楚。因此，研究趋化因子CXCL16及其受体CXCR6在AS疾病中的表达，以及炎症时CXCL16/CXCR6对各类免疫细胞的调控，对于进一步研究AS病因机制以及相应的生物制剂拮抗剂的研发具有积极的作用。
本课题主要研究AS患者外周血和关节液中CXCL16及其受体CXCR6的表达水平，以及其对免疫细胞的影响，从而探讨CXCL16/CXCR6对AS疾病的免疫作用及影响。
方法：
AS组研究对象为医院风湿免疫科住院和门诊治疗的AS患者，AS诊断参照美国纽约1984年修订标准，且排除心、肾、肝、肺、内分泌、血液以及其他自身免疫性疾病。对照组研究对象选自健康体检者，来源于体检中心。
流式细胞术检测外周血中淋巴细胞亚群（CD3+细胞、CD3+CD4+细胞、CD3+CD8+细胞、CD3-CD19+细胞和CD3-CD16+CD56+细胞）、γδT细胞（CD3+TCRγ+细胞）、MDSCs细胞（CD11b+CD33+CD14+HLADR-/Low）和调节性T细胞（CD4+CD25+CD127Low/-）的比例，同时检测CXCL16+和CXCR6+在外周血CD3+、CD4+、CD8+、CD14+和γδT细胞上的表达百分比；荧光定量PCR检测外周血浆和关节液中CXCL16和CXCR6中mRNA的表达水平；酶联免疫吸附法检测外周血浆和关节液中CXCL16蛋白的表达量；通过分离血液和关节液中单个核细胞，趋化实验检测外源性CXCL16对表达CXCR6受体的免疫细胞趋化能力的影响。
研究的实验数据采用GraphPad Prism5.0软件进行统计学的分析和描述，以P<0.05为有统计学意义。
结果：
1.与对照组相比，AS组外周血炎症指标如中性粒细胞绝对数、超敏C反应蛋白和血沉显著增高。但单核细胞绝对数和淋巴细胞绝对数无显著性的统计学差异。
2.与对照组相比，AS患者外周血中的免疫细胞如T细胞（CD3+细胞）、Th细胞（CD3+CD4+细胞）、γδT细胞（CD3+TCRγ+细胞）和MDSCs细胞（CD11b+CD33+CD14+HLADR-/Low细胞）的百分比显著增高，而AS组中NK细胞（CD3-CD16+CD56+细胞）的百分比显著降低。但Tc细胞（CD3+CD8+细胞）、B细胞（CD3-CD19+细胞）和调节性T细胞（CD4+CD25+CD127Low/-细胞）的百分比无显著性的统计学差异。
3.CXCL16+在AS组外周血CD3+细胞、CD4+细胞和CD8+细胞中的表达百分比明显显著高于对照组，而CXCL16+在AS组外周血CD14+细胞和γδT细胞中的表达百分比与对照组相比，无显著性的统计学差异。
4.CXCR6+在AS组外周血CD3+细胞、CD4+细胞、CD8+细胞和γδT细胞中的表达百分比显著高于对照组，而CXCR6+在AS组外周血CD14+细胞中的表达百分比与对照组相比无显著性的统计学的差异。
5.与对照组血液相比，AS组血液和关节液中CXCL16和CXCR6的mRNA水平显著升高。另外，与AS组血液相比，AS组关节液中CXCL16和CXCR6的mRNA表达水平较外周血显著升高。
6.不同浓度的外源性CXCL16对免疫细胞的趋化指数值不同，其中CXCL16浓度为10ng/ml时，趋化指数值最高，说明该浓度CXCL16对免疫细胞的趋化作用最明显。另外，AS关节液中的趋化指数值也明显高于AS组血液。
结论：
AS患者外周血炎症指标如中性粒细胞绝对数、超敏C反应蛋白和血沉显著高于健康体检者。AS患者外周血中CXCL16和CXCR6在CD3+细胞、CD4+细胞和CD8+细胞上的表达升高，血浆和关节液中CXCL16/CXCR6转录基因以及CXCL16蛋白表达明显升高，CXCL16对AS患者免疫细胞的趋化作用更强。研究表明CXCL16/CXCR6通过趋化外周循环中的免疫细胞聚集到炎症部位参与AS的发展过程。本研究对以趋化因子受体CXCR6为靶点的AS治疗策略提供新思路。
强直性脊柱炎（ankylosing spondylitis，AS）是一种慢性风湿性的炎症疾病，其特点是侵犯轴性关节部位，如脊柱和骶髂关节，好发于20-30岁的青年，以男性患者为主。AS疾病常常伴随着炎症的局部骨化过程，导致病理学上的脊柱强直和椎间盘周围的纤维及韧带钙化，易发生脊柱的强直以及关节的畸形，但其根本的发病机制目前还不清楚。
近来研究发现，如T淋巴细胞、巨噬细胞等免疫细胞及其产生的细胞因子IL-2、TNF-α、IL-17和趋化因子CCL2、CXCL8、CXCL9等均可能参与了AS疾病的发生发展。其中CXCL16是一种由防御性免疫细胞产生并可发挥多种生物学作用的趋化因子，在多种炎症性疾病以及肿瘤中高表达，参与炎症浸润、肿瘤细胞增殖等。但目前对于CXCL16/CXCR6是否在AS疾病的病理生理过程发挥作用，以及对AS疾病中免疫细胞的调控机制尚不清楚。因此，研究趋化因子CXCL16及其受体CXCR6在AS疾病中的表达，以及炎症时CXCL16/CXCR6对各类免疫细胞的调控，对于进一步研究AS病因机制以及相应的生物制剂拮抗剂的研发具有积极的作用。
本课题主要研究AS患者外周血和关节液中CXCL16及其受体CXCR6的表达水平，以及其对免疫细胞的影响，从而探讨CXCL16/CXCR6对AS疾病的免疫作用及影响。
方法：
AS组研究对象为医院风湿免疫科住院和门诊治疗的AS患者，AS诊断参照美国纽约1984年修订标准，且排除心、肾、肝、肺、内分泌、血液以及其他自身免疫性疾病。对照组研究对象选自健康体检者，来源于体检中心。
流式细胞术检测外周血中淋巴细胞亚群（CD3+细胞、CD3+CD4+细胞、CD3+CD8+细胞、CD3-CD19+细胞和CD3-CD16+CD56+细胞）、γδT细胞（CD3+TCRγ+细胞）、MDSCs细胞（CD11b+CD33+CD14+HLADR-/Low）和调节性T细胞（CD4+CD25+CD127Low/-）的比例，同时检测CXCL16+和CXCR6+在外周血CD3+、CD4+、CD8+、CD14+和γδT细胞上的表达百分比；荧光定量PCR检测外周血浆和关节液中CXCL16和CXCR6中mRNA的表达水平；酶联免疫吸附法检测外周血浆和关节液中CXCL16蛋白的表达量；通过分离血液和关节液中单个核细胞，趋化实验检测外源性CXCL16对表达CXCR6受体的免疫细胞趋化能力的影响。
研究的实验数据采用GraphPad Prism5.0软件进行统计学的分析和描述，以P<0.05为有统计学意义。
结果：
1.与对照组相比，AS组外周血炎症指标如中性粒细胞绝对数、超敏C反应蛋白和血沉显著增高。但单核细胞绝对数和淋巴细胞绝对数无显著性的统计学差异。
2.与对照组相比，AS患者外周血中的免疫细胞如T细胞（CD3+细胞）、Th细胞（CD3+CD4+细胞）、γδT细胞（CD3+TCRγ+细胞）和MDSCs细胞（CD11b+CD33+CD14+HLADR-/Low细胞）的百分比显著增高，而AS组中NK细胞（CD3-CD16+CD56+细胞）的百分比显著降低。但Tc细胞（CD3+CD8+细胞）、B细胞（CD3-CD19+细胞）和调节性T细胞（CD4+CD25+CD127Low/-细胞）的百分比无显著性的统计学差异。
3.CXCL16+在AS组外周血CD3+细胞、CD4+细胞和CD8+细胞中的表达百分比明显显著高于对照组，而CXCL16+在AS组外周血CD14+细胞和γδT细胞中的表达百分比与对照组相比，无显著性的统计学差异。
4.CXCR6+在AS组外周血CD3+细胞、CD4+细胞、CD8+细胞和γδT细胞中的表达百分比显著高于对照组，而CXCR6+在AS组外周血CD14+细胞中的表达百分比与对照组相比无显著性的统计学的差异。
5.与对照组血液相比，AS组血液和关节液中CXCL16和CXCR6的mRNA水平显著升高。另外，与AS组血液相比，AS组关节液中CXCL16和CXCR6的mRNA表达水平较外周血显著升高。
6.不同浓度的外源性CXCL16对免疫细胞的趋化指数值不同，其中CXCL16浓度为10ng/ml时，趋化指数值最高，说明该浓度CXCL16对免疫细胞的趋化作用最明显。另外，AS关节液中的趋化指数值也明显高于AS组血液。
结论：
AS患者外周血炎症指标如中性粒细胞绝对数、超敏C反应蛋白和血沉显著高于健康体检者。AS患者外周血中CXCL16和CXCR6在CD3+细胞、CD4+细胞和CD8+细胞上的表达升高，血浆和关节液中CXCL16/CXCR6转录基因以及CXCL16蛋白表达明显升高，CXCL16对AS患者免疫细胞的趋化作用更强。研究表明CXCL16/CXCR6通过趋化外周循环中的免疫细胞聚集到炎症部位参与AS的发展过程。本研究对以趋化因子受体CXCR6为靶点的AS治疗策略提供新思路。