(一) 目的 研究手十二井穴刺络放血疗法对局灶性脑缺血大鼠模型大脑皮层的c-fos、HSP70、NOS及nNOS表达的影响，以阐明此疗法对脑缺血时脑保护作用的分子机制。 (二) 方法 采用大脑中动脉凝闭(MCAO)的方法制备局灶性脑缺血大鼠模型；分别采用NADPH-d组化方法和免疫组织化学法(ABC法)观察缺血区皮层脑组织c-fos、HSP70、NOS及nNOS阳性细胞的表达变化及施加井穴放血法后对其表达的干预作用。 (三) 结果 (1) 急性缺血性脑损伤可快速诱导c-fos蛋白在皮层缺血区脑组织的表达，其表达有随缺血时间延长而逐渐增多的趋势，提示脑的缺血性损伤可应激性地增强神经细胞对缺血、缺氧的耐受和适应能力，而应用井穴放血的干预治疗可明显上调缺血区皮层脑组织c-fos的表达水平，进一步增强脑组织对抗缺血性损伤的应激能力，抵抗缺血性脑损害的进一步发展。 (2) 急性缺血性脑损伤可快速诱导HSP70蛋白在皮层缺血区脑组织的表达增加，其表达有随缺血时间延长而逐渐增多的趋势，提示脑的缺血性损伤可应激性地增强神经细胞对缺血、缺氧的耐受和适应能力，而应用井穴放血的干预治疗可明显上调缺血区皮层脑组织HSP70的表达水平，进一步增强脑组织对抗缺血性损伤的应激能力，抵抗缺血性脑损害的进一步发展，增强脑修复能力。 (3) 模型组和治疗组大脑皮层中NOS阳性细胞较对照组明显增多，统计学有明显差异(P＜0.05)；其中1h、3h、6h治疗组缺血侧大脑皮层中NOS细胞数量较模型组有所减少：1h、3h组呈现非常显著的差异(P＜0.01)，6h组也有显著的差异(P＜0.05)。而即刻治疗组和12h治疗组与假手术组相比较，则差异不显著(P＞0.05)。 (4) 模型组和治疗组大脑皮层中nNOS阳性细胞较对照组明显增多，统计学有明显差异(P＜0.05)；即刻—6h治疗组缺血侧大脑皮层中nNOS数量较模型组有所减少，其中即刻、1h、3h组呈现非常显著的差异(P＜0.01)，6h组也有显著 中文摘要的差异(P<0.05)。而12h治疗组与模型组相比较，则差异不显著(P>0.05)。·(四)结论 (1)脑缺血能诱导。一fos蛋白的表达，。一fos蛋白表达既与缺血的严重程度有关，也反应神经元的应激反应能力。早期施加井穴放血疗法能增强。一fos蛋白表达，提高神经细胞的应激能力，从而提高缺血区脑组织的抗损伤修复能力，减缓神经细胞凋亡的发展，有效地保护脑细胞，表明井穴放血法对中风早期有一定的急救作用。 (2)本结果提示，急性缺血性脑损伤后及早施加井穴放血疗法可提高缺血区脑组织的抗损伤应激能力，减缓神经细胞凋亡的发展，产生有效的脑保护作用，表明井穴放血法对中风早期有一定的急救作用。 (3)脑缺血损伤可促进NOS神经元表达，缺血后1一6h内给予手十二井穴刺络放血疗法可明显下调NOS的表达，对缺血的神经细胞起到保护作用。即刻治疗可能对脑缺血的干预效果不佳，而缺血后12h则失去了最佳治疗时机。NOS是NO生成的关键酶类，是脑缺血时神经损伤的重要机制之一，手十二井穴刺络放血疗法对抑制其活性、进而减少NO的过量生成有重要作用; (4)脑缺血损伤可促进nNOS神经元表达，缺血即刻一6h内给予手十二井穴刺络放血疗法可明显下调nNOS的表达，对缺血的神经细胞起到保护作用，而缺血后12h则失去了最佳治疗时机。 综上所述:脑缺血后，在治疗时间窗内施予手十二井穴刺络放血疗法，可抑制NOS、nNOS的过度表达，减少NO的过度生成，减轻其所致的神经毒性;同时也提高了受损神经细胞的应激能力，诱导或上调c一fos、HsP7o的表达，从而提高缺血区脑组织的抗损伤修复能力，减缓神经细胞凋亡的发展，挽救了半暗区神经元。