马铃薯的组织培养及耐盐诱变育种研究

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马铃薯(Solanum tuberosum L.)是我国重要的粮食及经济作物,在农业生产和人民生活中占有非常重要的地位,盐渍土壤严重影响了马铃薯的生长和产量。因此,选育耐盐的马铃薯品种,具有重要的经济价值。本研究以马铃薯中1、中2、中3、中4为实验材料,通过茎尖脱毒作用,用分化培养基(MS+BA 2mg/L+NAA 0.1mg/L+GA30.1 mg/L+3%蔗糖+6%琼脂),建立了四个马铃薯品种的组织培养再生体系。实验以马铃薯脱毒试管苗茎段为材料,1.0%NaCl为筛选压力,通过60Coγ射线辐照、EMS浸泡及60Coγ射线和EMS复合的方法诱导马铃薯耐盐突变株,并获得了耐1.0%NaCl的马铃薯突变株WL-1。同时本实验研究了60Coγ射线、EMS处理对马铃薯茎段生长及突变率的影响。研究结果表明:小剂量(10Gy)的60Coγ射线能促进马铃薯茎段的生长,随着辐照剂量的增大,对马铃薯试管苗的抑制作用逐渐增强。顶芽的辐射敏感性低于侧芽;60Coγ射线辐照马铃薯茎段的半致死剂量和突变高峰为20Gy,致死剂量为40Gy;小剂量(0.1%)的EMS对茎段损伤极小,而高剂量长时间的EMS处理会导致茎尖或茎段白化,失去生长能力,EMS处理马铃薯茎段的半致死剂量为0.7%+4h,致死剂量为1.0%+3h。通过试管苗外部指标分析、生化分析及盆栽盐胁迫的方法对耐盐突变株WL-1进行了分析,结果表明:当NaCl浓度高于0.6%时,突变株WL-1的株高、脯氨酸含量、叶绿素含量显著高于对照,而丙二醛含量较低。通过分析WL-1和对照的SDS-PAGE图谱显示:WL-1的一条蛋白表达量明显高于对照。盆栽盐胁迫中,当盐浓度为0.4%时对照株开始出现叶色变黄萎蔫,两者长势差别不大,而当盐浓度大于0.8%时耐盐突变株长势明显好于对照。用RAPD分子标记方法进一步对突变株WL-1进行DNA水平鉴定,得出了突变株WL-1与中3马铃薯的遗传相似系数为0.703,因此从基因的水平上证明了该株系为突变株。
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