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猪瘟(Classical Swine Fever CSF)是由猪瘟病毒(CSFV)引起的一种猪的高度接触性烈性传染病，死亡率极高，给世界养猪业造成了巨大的经济损失。我国已将猪瘟列为一类动物疫病。60年代我国研制的猪瘟兔化弱毒疫苗在猪瘟病毒防治中起了决定性作用，有效的控制了猪瘟在我国大规模的流行。但是近年来，猪瘟在各地仍不断有散发和流行。传统疫苗可能已无法有效地控制该病。因此，发展安全、有效的新型疫苗控制CSF变得非常的紧迫。佐剂是提高核酸疫苗免疫保护力的重要途径。本研究构建pcE2与粒细胞—巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)共表达载体，以探讨GM-CSF对核酸疫苗pcE2免疫保护力的影响。1、GM-CSF与猪瘟病毒E2基因共表达载体的构建及其诱导的免疫应答：为探讨粒细胞—巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)对猪瘟病毒E2基因核酸疫苗小鼠免疫应答诱导的影响。将CSFV E2基因和GM-CSF片段插入真核表达载体pcDNA3.0内构建pcE2，pcE2-GF及pcGF核酸疫苗。动物试验时，50只雌性供试小鼠随机分为5组，即pcE2(A组)，pcE2-GF(B组)，pcDNA3.0(C组)，pcGF(D组)，生理盐水(E组)，每组10只。0，2，4周于小鼠左后肢胫前肌进行肌注免疫，质粒量为每只每次50μg。每次免疫前和末次免疫后2周尾静脉采血收集血清，ELISA检测血清内特异性IgG水平。末次免疫后1周每组随机选3只无菌取脾，MTT法检测脾淋巴细胞增殖情况。结果表明，与对照组比较，pcE2和pcE2-GF 3次免疫小鼠，IgG抗体水平逐渐增高，淋巴细胞的转化率也明显增高，且pcE2-GF免疫组的IgG抗体水平和淋巴细胞的转化率均高于pcE2免疫组。2、GM-CSF与猪瘟病毒E2基因共表达载体的粘膜免疫：为探讨猪瘟核酸疫苗粘膜免疫诱导免疫应答的情况，将50只雌性供试小鼠随机分为5组，即pcE2(A组)，pcE2-GF(B组)，pcDNA3.0(C组)，pcGF(D组)，生理盐水(E组)，每组10只，于0、2、4周，各滴鼻免疫1次，共3次。免疫剂量为每只每次5％司本+1％甘油+50μg DNA质粒，免疫的总体积为20μl／只／次，生理盐水为每只每次20μl。每次免疫前和末次免疫后2周尾静脉采血收集血清和小鼠新鲜粪便。ELISA检测血清内特异性IgG、IgA水平和粪便内的sIgA水平。结果表明，pcE2免疫组和pcE2-GF免疫组均可诱导全身免疫应答和粘膜免疫应答，加强免疫后的抗体水平逐渐升高，粪样中的sIgA也有明显的升高，且pcE2-GF共表达疫苗免疫组明显高于CSFV E2基因疫苗免疫组。细胞因子GM-CSF可有效提高猪瘟病毒E2基因核酸疫苗的免疫应答。CSFV E2基因疫苗和GM-CSF与CSFV E2基因的共表达基因疫苗(pcE2-GF)滴鼻免疫小鼠均可诱导全身免疫应答和粘膜免疫应答，GM-CSF对CSFV E2基因疫苗的粘膜免疫有增强作用。本研究为猪瘟基因工程疫苗的研究提供了新的思路。