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目的:采用罗格列酮(RSG)预处理小胶质细胞,观察小胶质细胞被凝血酶(T)激活后PPARγ、catalase的表达变化,探讨RSG在脑出血后继发性脑损伤中的保护作用。 方法: 1.体外培养小胶质细胞N9,通过thrombin刺激小胶质细胞激活。设定时间,通过不同浓度的thrombin刺激小胶质细胞,用ELISA法检测细胞上清液中TNF-α含量、Griess法检测NO含量,由此确定Thrombin激活小胶质细胞的最佳浓度。再以最佳浓度分别作用不同时间,采用上述方法再次检测细胞上清液中TNF-α及NO的含量,以确定该浓度激活小胶质细胞的最佳时间。 2.不同浓度RSG预处理小胶质细胞后,观察小胶质细胞被thrombin激活后PPARγ、catalase表达的变化。实验随机分为8组:正常对照组、thrombin刺激组(T刺激组或T组)、RSG(10μM)+T组、RSG(20μM)+T组、RSG(30μM)+T组、RSG(40μM)+T组、RSG(50μM)+T组、RSG(60μM)+T组。每组设3个样本,分别来自3批独立培养的细胞。不同浓度RSG预处理小胶质细胞的时间均为30分钟,然后加入thrombin(20U/ml),共同作用12小时。分别用Real-time PCR、Western Blot法检测小胶质细胞PPARγ、catalase的表达,同时采用H2O2试剂盒检测细胞上清液中H2O2含量。实验数据用mean±SEM表示,运用SPSS20.0软件对数据处理,采用单因素方差分析,多组均数间两两比较采用LSD或Dunnett’s-T3检验,P<0.05为差异有统计学意义。 结果: 1.Thrombin(20U/ml)作用小胶质细胞12小时能成功诱导激活小胶质细胞分泌TNF-α、NO,与正常对照组比较有明显统计学差异。激活的小胶质细胞胞体较静息时略有增大,呈不规则、高分枝状。 2.与正常对照组相比,T刺激组细胞PPARγ、catalase在基因和蛋白水平的表达均降低。RSG浓度为10μM-40μM时,RSG呈剂量依赖性的促进了小胶质细胞PPARγ、catalase的表达,与T刺激组对比差异显著,RSG浓度为50μM时,PPARγ、catalase的表达与40μM组相比无统计学差异,RSG浓度为60μM时,PPARγ、catalase的表达较50μM组下降,差异有统计学意义有统计学意义。检测细胞上清液中H2O2含量,T刺激组较正常对照组明显增加,经一定浓度范围RSG预处理,H2O2含量较T组明显减少。 结论: 1.Thrombin可激活MG,导致MG分泌TNF-α、NO及H2O2,PPARγ表达下调可能是导致氧化损伤的重要因素。 2.一定浓度范围内,RSG对MG预处理可以增加PPARγ及catalase的表达,并减少H2O2的含量,从而提高MG在应激状态下的抗氧化保护能力。