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目的:乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)感染是肝癌发生的重要危险因素,但其如何导致肝癌发生尚不清楚,目前认为由乙型肝炎病毒X基因编码的蛋白(HBx)在其中起着关键作用。当慢性乙型肝炎患者病情急性加重时,白细胞介素6(Interleukin-6,IL-6)水平上升,激活下游相关信号通路,促进肝癌的发生发展。其中IL-6/STAT3信号通路至关重要,其异常激活能促进卵巢癌、肺癌、前列腺癌、结直肠癌等恶性肿瘤中某些干性基因的表达,但其是否促进肝癌发展的机制尚不明确。本研究拟通过探索HBx对IL-6/STAT3通路的调控作用,及其二者与干性基因表达之间的关系,证明IL-6是驱动乙型肝炎病毒相关性肝癌的内在细胞因子,为今后靶向IL-6治疗肝癌提供理论依据。方法:将携带HBx基因的慢病毒感染肝癌细胞HLE,以获得稳定表达HBx的HLE细胞(HLE-HBx)。以HLE细胞作为对照,分别使用PCR、Western Blot、MTT、Transwell和细胞划痕实验检测HLE-HBx中HBx和IL-6的表达丰度、IL-6、IL-6R、STAT3和p-STAT3蛋白水平、对5-氟尿嘧啶的耐受程度、转移和迁移能力的变化。运用siRNA技术干扰PLC/PRF/5细胞中HBx表达,得到PLC-siHBx细胞株。运用Western Blot检测HLE-HBx和PLC-siHBx细胞株干性基因Oct4、EpCAM等的表达。用IL-6处理HLE和HLE-HBx细胞,检测IL-6/STAT3信号通路激活水平和干性基因表达水平的差异。结果:1.成功建立稳定表达株HLE-HBx细胞;2.比较HLE-HBx细胞和HLE细胞,结果显示HBx促进HLE肝癌细胞的耐药和迁移;3.HLE细胞稳转HBx后显示干性基因表达增加;4.HLE细胞转入HBx后发现IL-6、IL-6R、p-STAT3表达水平升高;5.用IL-6处理HLE、HLE-GFP、HLE-HBx后显示HBx通过IL-6/STAT3通路促进干性基因的表达;6.HBx通过IL-6/STAT3通路促进肝癌细胞的迁移。结论:研究结果表明HBx能促进肝癌细胞的耐药、迁移,其分子机制可能是通过激活IL-6/STAT3信号通路促进干性基因的表达。