【摘 要】
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糖尿病是世界上最常见的流行病之一,其死亡率在发达国家是仅次于心血管疾病和恶性肿瘤的第三大疾病。糖尿病是由体内胰岛素绝对或相对不足引起的葡萄糖、脂肪和蛋白质代谢紊乱。主要分为胰岛素依赖型糖尿病（I型,DIDM）、非胰岛素依赖型糖尿病（II型,NIDDM）、其他特定类型的糖尿病和妊娠期糖尿病。I型糖尿病的治疗包括免疫治疗、全胰腺和胰岛移植以及干细胞治疗。Ⅱ型糖尿病的治疗包括运动疗法、饮食疗法、药物疗法
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糖尿病是世界上最常见的流行病之一,其死亡率在发达国家是仅次于心血管疾病和恶性肿瘤的第三大疾病。糖尿病是由体内胰岛素绝对或相对不足引起的葡萄糖、脂肪和蛋白质代谢紊乱。主要分为胰岛素依赖型糖尿病（I型,DIDM）、非胰岛素依赖型糖尿病（II型,NIDDM）、其他特定类型的糖尿病和妊娠期糖尿病。I型糖尿病的治疗包括免疫治疗、全胰腺和胰岛移植以及干细胞治疗。Ⅱ型糖尿病的治疗包括运动疗法、饮食疗法、药物疗法和肠道菌群疗法。目前,糖尿病的临床治疗仍以联合用药为主,增加了患者的生理和经济负担。因此,开发具有新作用机制或新结构类型的高效低毒糖尿病药物已成为国际药物研发的热点。近年来,天然药物越来越被人们所青睐,从天然产物中筛选可促进内源性胰岛素分泌或促进干细胞向胰岛细胞进行定向分化的化合物可能会成为糖尿病治疗的新策略。本研究以胰岛素启动子为靶点,利用荧光素酶报告系统从天然小分子化合物中筛选能够促进胰岛素产生和促进干细胞定向分化为胰岛细胞的化合物,并对化合物的促胰岛素产生作用及可能的信号通路进行了初步研究。1.靶向胰岛素启动子的化合物筛选及鉴定本研究将pGL3-Insulin质粒（荧光素酶报告载体）转染入HEK-293T细胞中构建以Insulin启动子为靶点的筛选模型,并利用该筛选模型从本实验室的天然小分子化合物库中筛选可促进胰岛素表达的小分子化合物。结果发现,化合物T1-29、T2-5和T2-7均可以促进荧光素酶活性,通过Western blot进一步确认了T1-29、T2-5和T2-7对胰岛素的表达具有促进作用。2.目标化合物的作用浓度选择为进一步探究化合物T1-29、T2-5和T2-7对内源性胰岛素产生的影响以及对P19细胞向胰岛细胞分化的影响,我们首先对化合物的作用浓度进行了选择。首先利用不同浓度的三种化合物处理P19和INS-1细胞,之后通过MTT法检测细胞活力,并计算化合物对细胞的IC10值,以确定化合物的无毒浓度。MTT检测结果表明,化合物T1-29、T2-5和T2-7对P19细胞的IC10值分别为17.672±5.621μg/m L、132.111±36.889μg/m L和31.932±8.999μg/m L,对INS1的IC10值分别为120.44±81.567μg/m L、15.105±7.884μg/m L和9.703±3.263μg/m L,在前面的研究中发现这三种化合物在5μg/m L时均已具有很好的调控胰岛素表达活性,且此浓度低于上述IC10值,故选择此浓度作为后续实验的化合物浓度。3.目标化合物对体外肌肉细胞葡萄糖吸收的影响及其可能的机制研究为了进一步检测化合物的活性,我们测定了三种化合物对C2C12细胞葡萄糖吸收的影响。结果显示,化合物T1-29、T2-5和T2-7对C2C12的细胞葡萄糖吸收具有显著的促进作用。为了探讨化合物的作用机制,我们利用Western blot实验检测了化合物对胰岛素信号通路PI3K/AKT通路的影响,结果显示,三种化合物对PI3K/AKT通路均有不同程度的激活作用。本研究为糖尿病的治疗提供了新的天然小分子候选药物,同时也为促干细胞向胰岛细胞定向分化奠定了实验基础。
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