目的:本试验选用假蒟作为研究对象,通过体外试验和细胞试验、qPCR、Westem-blot等技术,研究了假蒟提取物体外抗氧化作用及对猪小肠上皮细胞的抗炎作用,旨在为其作为防治畜禽腹泻的中兽药饲料添加剂开发提供科学依据。方法:(1)通过体外抗氧化试验,研究了假蒟三种提取物(石油醚、正丁醇、乙酸乙酯)的抗氧化能力,通过ABTS等方法检测三种假蒟提取物的抗氧化能力并筛选其活性部位。(2)构建IPEC-J2细胞系,用三种假蒟提取物预处理24h,LPS诱导细胞产生炎症反应,收集细胞培养液的上清,用ELISA试剂盒检测炎性细胞因子TNF-α、IL-1和IL-6的浓度,筛选抗炎有效部位。(3)用LPS建立IPEC-J2细胞体外炎症模型,通过PCR技术检测细胞致炎性细胞因子IL-1、IL-6和TNF-α,细胞主要作用受体TLR2、TLR4和TLR9的表达水平,选择假蒟提取物抗炎最佳浓度进行后续试验。(4)用LPS建立IPEC-J2细胞体外炎症模型,假蒟预处理后,通过qPCR、Western blot检测NF-kB的p65及其磷酸化水平、MAPK的p38及其磷酸化水平,分析假蒟提取物对LPS致炎IPEC-J2细胞相关信号通路激活的影响,最后通过抑制剂验证假蒟提取物发挥抗炎作用的信号通路。结果:(1)抗氧化试验结果显示:假蒟正丁醇部位提取物的总生物碱、总酚含量最高,为2.818 mEq/100g、161.82 mg/g,总抗氧化活性由大到小依次是假蒟正丁醇提取物、乙酸乙酯提取物和石油醚提取物(P<0.05)。(2)结果表明三种假蒟提取物有一定的抗氧化作用,正丁醇部位提取物最佳。LPS组与空白组比较,IPEC-J2细胞的TNF-α、IL-6、IL-1含量均显著升高(P<0.05);与假蒟预处理+LPS组比较,TNF-α与IL-6、IL-1含量显著降低(P<0.05),产生的炎性细胞因子浓度,由高到低为乙酸乙酯提取物>石油醚提取物>正丁醇提取物。说明三种假蒟提取物中JZ组抗炎效果最佳,能够影响IPEC-J2细胞炎性因子的分泌,有效抑制炎症反应。(3)qPCR结果表明:与空白组比,1 μg/ml的LPS处理细胞24h后,IL-1、IL-6、TNF-α的表达显著上调,在应用浓度为10 μ g/ml的JZ后,IL-1、IL-6、TNF-α的表达明显下调。说明JZ能降低LPS诱导的炎症,浓度为10 μg/ml时能显著下调炎性因子的表达;LPS诱导后,TLR2和TLR9表达显著升高,而JZ组表达下调,说明JZ可抑制由TLR介导的炎症反应。(4)Western blot表明LPS组p65水平高表达,而不同浓度的JZ预处理后,p38磷酸化水平、p65及其磷酸化水平均明显降低,抑制了 NF-kB/p38MAPK信号通路的激活;而抑制剂验证的实验结果表明JZ通过抑制肠道上皮细胞NF-kB和p38MAPK信号通路来发挥抗炎作用。结论:三种假蒟提取物有一定的抗氧化作用,正丁醇部位提取物能有效富集抗氧化有效成分,抗氧化能力较高;假蒟正丁醇提取物能下调LPS诱导猪小肠上皮细胞中炎性因子表达水平,可能是通过抑制肠道上皮细胞NF-kB和p38MAPK信号通路的激活,来发挥抑制炎症的作用。