小鼠体外受精和精子冷冻的研究

来源 :扬州大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:willian_tang
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为建立一套小鼠体外受精体系,本研究对不同受精浓度、精子的浮游处理、注射激素后卵母细胞的不同收集时间进行比较;对CD-1、B6DF1、FVB、C57BL/6、DBA小鼠的卵母细胞进行直接、去卵丘细胞、切割透明带法处理后,再分别进行体外受精、体外培养和胚胎移植试验。结果表明,小鼠体外受精的精子适宜浓度为5-7×10~5个/ml。C57BL/6小鼠精子浮游处理有利于提高体外受精率。卵母细胞收集的最佳时间为注射hCG后15h。CD-1和B6DF1小鼠体外受精率及受孕率均高于近交系FVB、C57BL/6、DBA小鼠的受精率和受孕率。五种品系小鼠卵母细胞三种不同处理试验,受孕率均差异不显著;去卵丘细胞卵体外受精率(10-23%)均显著低于卵丘卵母细胞复合体的受精率(34-60%)和切割透明带卵的受精率(41-65%),而C57BL/6和DBA小鼠切割透明带卵的体外受精率还显著高于卵丘卵母细胞复合体的受精率。因此,C57BL/6和DBA小鼠理想的鲜精体外受精方法为切割透明带法,而CD-1、B6DF1、FVB小鼠切割透明带卵的受精率与卵丘卵母细胞复合体的受精率均差异不显著,故此三种品系小鼠则直接用卵丘卵母细胞复合体进行鲜精体外受精法简单有效。 为探索、建立一套小鼠精子冷冻方法,本研究通过CPS和RS318两种冷冻液冷冻小鼠精子试验;进行干、湿解冻法和解冻时采用离心法和稀释法处理冷冻液试验;并以RS318为冷冻液,对B6DF1、CD-1、DBA、C57BL/6小鼠精子分别进行快速冷冻和缓速冷冻,将解冻的精子和鲜精分别与同品系小鼠的卵丘卵母细胞复合体进行体外受精,快速冷冻精子解冻后还与去卵丘细胞卵、切割透明带卵受精,然后进行体外培养、胚胎移植试验。根据体外受精率和受孕率对小鼠精子冷冻方法进行筛选。结果,两种冷冻液试验和干、湿解冻法试验及离心法、稀释法处理冷冻液试验的受精率均差异不显著。B6DF1、CD-1、C57BL/6小鼠快速冷冻精子试验(与卵丘卵母细胞复合体)的受精率(35%、34%、17%)显著低于鲜精的(60%、59%、34%)、缓速冷冻精子试验的受精率(62%、58%、30%),后两者受精率均差异不显著;此三种品系小鼠快速与缓速冷冻精子体外受精试验的受孕率均显著低于鲜精试验的受孕率。DBA小鼠快速冷冻精子体外受精试验的受精率和受孕率也低于缓速冷冻精子、鲜精体外受精试验的受精率和受孕率,但三种精子处。四种品系小鼠卵母细胞切割透明带后与解冻精子的体外受精率(43一49%)显著高于去卵丘细胞卵的受精率(7一19%),并高于卵丘卵母细胞复合体的受精率(17一35%)。因此缓速冷冻法是小鼠精子冷冻的适宜方法,干解冻法和稀释法处理冷冻液可简单有效地解冻精子,切割透明带法可提高卵与解冻精子的受精率。
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