罗汉果的组织培养与农杆菌介导遗传转化体系的建立研究

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本论文以青皮果和圆形红毛子两个罗汉果品种为材料,系统地研究了罗汉果的组织培养,建立了农杆菌介导的罗汉果遗传转化体系,成功地获得了罗汉果GUS基因转化植株,并进行了检测。研究结果包括: 1、不定芽的直接分化途径可作为罗汉果组织培养的主要途径;脱分化途径产生的罗汉果愈伤组织分化频率低,不利于罗汉果组织培养。 2、叶片、腋芽是罗汉果组织培养的适宜材料,直接分化不定芽的频率高;愈伤组织的诱导分化以腋芽为外植体的芽分化率相对较高。 3、罗汉果叶片的分化培养基以MS+6-BA2.0mg/L+IBA0.5mg/L为最佳,分化率为61.9%,平均芽数为5.48个/块;腋芽的分化培养基以MS+6-BA1.0mg/L+IBA0.5mg/L最佳,芽分化率达98.9%,平均芽数5.27个/块。 4、在2~5代继代培养中,随继代增殖代数增加,罗汉果叶、芽直接分化芽的能力不断下降。 5、罗汉果愈伤组织的芽分化率随愈龄的增加而下降,以5天愈龄的愈伤组织芽分化率最高,分化率为8%。 6、罗汉果不同部位叶片、腋芽的芽分化效果存在差异,以发育较成熟的3~4节间的叶片、腋芽的芽分化率最高,分别达到48.7%和96.9%。 7、罗汉果二次培养苗叶片仍具有较高的分化能力,青皮果芽分化率可达65%,圆形红毛子芽分化率可达50%。 8、罗汉果组培苗的生根壮苗培养以1/2MS+IBA0.8~1.0mg/L+MET0.4~0.6mg/L厂西大学硕士学位论文罗汉果的组织培养与农杆菌介导遗传转化体系的建立研究为最佳培养基,生根率达100%,根数约为5.5一6.03条/苗。9、罗汉果叶盘的幻n基础抗性浓度为6m叭,罗汉果非转化体在含Km的培养基中难以分化出根。 10、罗汉果预培养4天后进行转化,GUS基因的瞬时表达效果最好。瞬时表达检测发现:21.7%叶盘被全面染成较深蓝色,69.6%叶盘边缘和内部均有较深蓝斑,8.7%叶盘边缘被染成蓝色。瞬时表达率达100%。11、罗汉果叶盘在菌液浓度OD60。七0 .1一0 .5的农杆菌中浸泡5一60秒后,共培养48小时,GUS瞬时表达效果最佳,瞬时表达率为100%。12、先再生后选择的转化体筛选方法导致大量假转化体形成,而先选择后再生,结合生根筛选,能有效去除假转化体。13、GUS基因能在罗汉果完整植株中稳定表达,已获得罗汉果GUS基因转化植株。
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