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本研究分为两部分。
第一部分 C57BL/6小鼠胶原性关节炎模型的建立
目的:用鸡Ⅱ型胶原(chick collagenⅡ,CⅡ)与完全弗氏佐剂(completeFreundadjuvant,CFA)皮内免疫C57BL/6小鼠,建立稳定的C57BL/6小鼠胶原性关节炎模型,观察CIA小鼠模型的可重复性。
方法:用鸡Ⅱ型胶原(chick collagenⅡ,CⅡ)与完全弗氏佐剂(completeFreund adjuvant,CFA)在C57BL/6小鼠尾根部皮内注射,观察小鼠生长及体重情况;观察关节部位的肿胀并根据其肿胀程度进行关节炎指数评分;采用关节部位X线摄片、组织病理学等方法进行小鼠的病理学特征分析。
结果:1)模型组小鼠于初次免疫后23天出现关节红肿,首发多见于趾间关节,随后蔓延至足垫及踝关节,并可累及前爪,关节炎指数增加,关节活动障碍。初次免疫后35天发病率达到50%,至初次免疫后45天,发病率达到最大65%,关节炎指数涵盖1-16分;2)X线摄片评价模型组小鼠关节边缘模糊甚至融合,关节间隙狭窄,周围软组织影增厚,同时新生骨增生明显,导致关节出现强直、畸形;3)组织病理学评价模型组小鼠关节间隙变窄、炎性细胞浸润、滑膜组织增生侵入软骨和骨组织中,软骨和骨组织破坏,边缘不规则。
结论:本实验成功建立C57BL/6小鼠胶原性关节炎模型,鸡Ⅱ型胶原诱导的C57BL/6小鼠CIA模型的病理学特征与人类RA极为相似,为更好地进行人类RA的相关研究提供了一个良好的动物模型。
第二部分 电针、A2AR拮抗剂和A2AR激动剂干预对CIA小鼠关节炎症的影响
目的:初步探讨电针(Electroacupuncture EA)抗炎效应与腺苷A2AR受体(A2AR)的关系,为针刺治疗类风湿关节炎提供腺苷途径的理论支持。
方法:于首次免疫后30d筛选出关节炎指数4分以上的发病鼠40只,按关节炎指数从小到大标号(指数范围4-16),根据随机数字表随机分为4组,即模型组、电针组、激动剂组和电针加拮抗剂组,每组10只。电针组和电针加拮抗剂组小鼠以自制布袋固定,选取双侧足三里(后三里)穴和三阴交穴进行电针治疗。在初次免疫后第5周开始,1次/d,连续针刺治疗2周。生理组和模型组用同样的方法进行固定,每天1次,每次20分钟,连续两周。电针加拮抗剂组每日电针前给予A2AR拮抗剂SCH58261腹膜腔注射,激动剂组给予A2AR激动剂CGS21680腹膜腔注射,生理组和模型组给予同体积载体溶液(二甲基亚砜+生理盐水)腹膜腔注射。观察干预后各组小鼠关节炎指数、膝踝关节组织病理和X线的变化,并用ELISA法检测各组小鼠肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平。进行统计学分析,评价针刺对胶原诱导性关节炎小鼠的治疗作用,并推测其发挥作用与腺苷的关系。
结果:电针组和激动剂组小鼠的TNF-α含量、病理切片评分和X线评分明显低于模型组,差异有统计学意义(P<0.01),电针组和激动剂组比较差异无统计学意义(P>0.05),提示电针治疗和注射激动剂对CIA小鼠均有抗炎作用;而电针加拮抗剂组小鼠的的以上指标与模型组比较,差异无统计学意义(P>0.05),电针联合拮抗剂对CIA小鼠干预后,电针的抗炎作用被显著削弱,表明拮抗剂可能通过封闭A2AR从而削弱电针抗炎效应,提示电针抗炎效应与A2AR密切相关。
结论:电针治疗和注射激动剂能改善CIA小鼠的关节炎症状,而电针联合拮抗剂对CIA小鼠干预后,电针的抗炎作用被抑制,从反面提示电针可能增加内源性腺苷的含量,通过激动A2AR而发挥抗炎效应,这可能是其治疗类风湿关节炎的作用机制之一。