【摘 要】
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目的:探究缺氧微环境下HIF-1α基因和RACGAP1基因对人肝癌细胞系Huh-7与Hep3B细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响及其之间的调控关系。方法:构建人肝癌Huh-7与Hep3B细胞缺氧模型。实验设立空白对照组（control）、无义质粒组（LV-OE-NC、LV-RNAi-NC）、HIF-1α敲减组（LV-HIF-1α-RNAi）、RACGAP1敲减组（LV-RACGAP1-RNAi）、H
【基金项目】
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广西肝胆疾病临床医学研究中心:ALPPS Ⅰ期促进原发性肝癌侵袭迁移的分子机制研究（桂科AD17129025）；
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目的:探究缺氧微环境下HIF-1α基因和RACGAP1基因对人肝癌细胞系Huh-7与Hep3B细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响及其之间的调控关系。方法:构建人肝癌Huh-7与Hep3B细胞缺氧模型。实验设立空白对照组（control）、无义质粒组（LV-OE-NC、LV-RNAi-NC）、HIF-1α敲减组（LV-HIF-1α-RNAi）、RACGAP1敲减组（LV-RACGAP1-RNAi）、HIF-1α敲减+RACGAP1敲减组（LV-HIF-1α-RNAi+LV-RACGAP1-RNAi）;HIF-1α过表达组（LV-OE-HIF-1α）、RACGAP1过表达组（LV-OE-RACGAP1）。实验采用免疫荧光检测慢病毒转染效率;采用Western blot、q PCR检测HIF-1α和RACGAP1表达;采用CCK-8、流式细胞术、划痕实验和Transwell侵袭实验分别检测细胞的增殖、凋亡、迁移和侵袭能力。结果:本研究构建的慢病毒转染细胞模型,转染成功率75%以上。与对照组及无义质粒组相比较,抑制HIF-1α的表达,RACGAP1基因的表达量降低（P<0.05）,细胞的增殖、迁移、侵袭能力降低（P均<0.05）,细胞凋亡增多（P<0.05）。相反,与对照组及无义质粒组相比较,过表达HIF-1α,RACGAP1基因的表达量升高（P<0.05）,细胞的增殖、迁移、侵袭能力增高（P均<0.05）,细胞凋亡减少（P<0.05）。与对照组及无义质粒组相比较,抑制RACGAP1的表达,HIF-1α的表达量降低（P<0.05）,过表达RACGAP1,HIF-1α基因的表达量升高（P<0.05）。抑制RACGAP1表达,细胞的增殖能力低于对照组（P<0.05）,细胞凋亡高于对照组（P<0.05）。抑制HIF-1α+RACGAP1表达,细胞的侵袭能力显著低于对照组及无义质粒组（P均<0.01）,细胞凋亡显著高于对照组及无义质粒组（P<0.01）。结论:（1）本研究成功构建了缺氧人肝癌Huh-7与Hep3B细胞系模型,并使用慢病毒成功转染人肝癌Huh-7与Hep3B细胞系。（2）缺氧微环境下,过表达HIF-1α促进肝癌细胞的增殖、迁移、侵袭能力,抑制细胞凋亡;过表达RACGAP1促进肝癌细胞的增殖,抑制细胞凋亡。（3）HIF-1α表达与RACGAP1表达呈正相关,并影响肝癌细胞的增殖、迁移、侵袭能力及细胞凋亡的能力;RACGAP1与HIF-1α对肝癌细胞增殖、迁移/侵袭以及凋亡的调控存在协同作用。
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