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该实验采用超速离心法制备人血浆高密度脂蛋白(high density lipoprotein,HDL)(d=1.063~1.210g/cm<3>),经过乙醇/乙醚法脱脂得到HDL中载脂蛋白成分(Apolipoproteins of HDL,ApoHDL),高效灌注色谱仪阴离子交换树脂分离ApoHDL各组分,收集各组分峰,经超滤离心脱盐浓缩后用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE)鉴定得到纯的ApoA-Ⅰ(Apolipoprotein A-Ⅰ).分别给小鼠尾静脉注射内毒素(lipopolysaccharides,LPS)、LPS+ApoA-Ⅰ、LPS+ApoA-Ⅰ+无脂蛋白血浆(lipoprotein free fraction,LFF,d>1.210 g/cm<3>)后连续48小时观察小鼠的死亡率和存活时间.我们分别用LPS、LPS+ApoA-Ⅰ、LPS+ApoA-Ⅰ+LFF、LPS+HDL、LPS+HDL+LFF刺激小鼠腹腔巨噬细胞,MTT法检测LPS激活巨噬细胞释放的细胞因子对L929细胞的杀伤作用.我们用ApoA-Ⅰ包被酶标板,研究异硫氰酸荧光素酯标记的内毒素(fluorescein isothiocyanate-lipopolysaccharide,FITC-LPS)对ApoA-Ⅰ和ApoA-Ⅰ+LFF的体外结合能力,结果显示ApoA-Ⅰ和ApoA-Ⅰ+LFF组均可体外结合FITC标记的LPS,ApoA-Ⅰ+LFF的结合能力(64.47±8.06)比ApoA-Ⅰ(24.35±3.70)更显著(p<0.01).为了直观显示ApoA-Ⅰ与LPS的结合,用3mm直径的聚苯乙烯小珠代替酶标板,在荧光显微镜下直接观察到ApoA-Ⅰ与FITC-LPS的结合.我们用LPS+ApoA-Ⅰ、LPS+ApoA-Ⅰ+LFF及LPS分别与小鼠腹腔巨噬细胞培养后用ELISA方法测定培养上清液中巨噬细胞释放TNF-α的含量.以上结果表明:(1)ApoA-Ⅰ具有结合和抗内毒素的作用,是HDL抗内毒素作用的主要承担者,LFF增强ApoA-Ⅰ抗内毒素功能;(2)ApoA-Ⅰ可直接结合LPS;(3)我们推测ApoA-Ⅰ分子中至少存在两种LPS结合部位,一种是可能通过ApoA-Ⅰ两性螺旋结构中脂质结合部位直接与LPS分子中脂质A结合,另一种是可能通过LBP结合部位结合LBP后间接结合LPS.