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研究背景与常规IVF方案相比,人体外未成熟卵母细胞成熟技术(IVM)仍有很大的提升空间。褪黑素作为一种强效广谱抗氧化剂,可以清除体外培养条件下过多的氧自由基(ROS),从而抑制氧化应激对卵母细胞及胚胎的损伤。褪黑素添加于IVM培养液中是否可以促进IVM技术中未成熟卵母细胞成熟及发育潜能,从而作为改进IVM技术方案的突破点?本研究在人胚胎培养液中加入不同浓度褪黑素,探索对IVM技术中产生的人类早期胚胎的影响,旨在为IVM技术的改进提供理论依据。方法从2015年3月到2015年12月,共收集安徽医科大学第一附属医院生殖医学中心ICSI治疗周期患者未成熟卵母细胞353枚,患者年龄在35岁以下列入研究对象。人未成熟卵母细胞在含有10-5褪黑素的IVM培养液中培养至MⅡ期,培养成熟的卵母细胞行ICSI后,移至含有五组不同浓度褪黑素(0、10-11、10-9、10-7、10-5M)的胚胎培养液中继续培养,观察胚胎后续发育情况。挑选优质囊胚行array CGH检测,以评估褪黑素添加于IVM培养液及胚胎培养液,对囊胚安全性的影响。结果经过24~26 h的体外培养,共获得290枚成熟卵母细胞,用于评估褪黑素对胚胎后续发育的影响。胚胎卵裂率、优质囊胚率在五组之间均无统计学差异。囊胚率在4种褪黑素处理组中与对照组无显著差异,但是囊胚率在10-9M组最高,在10-5M组最低,10-9M组囊胚率显著高于10-5M组(47.1%vs 14.7%),差异具有统计学意义(P=0.002,c2=9.500)。在GV期和MⅠ期亚组中,卵裂率、囊胚率、优质囊胚率在不同浓度褪黑素处理的五组间均无显著差异。GV期亚组中。囊胚率在0M组最高(42.9%),在10-5M组最低(13.6%);优质囊胚率在0M组最高(19.0%),在10-5M组最低(4.5%)。在MⅠ期亚组中,囊胚率在10-9M组最高(64.0%),而在10-5M组最低(16.7%);优质囊胚率在10-9M组最高(24.0%),而在10-7M组最低(8.0%),本研究中共培养获得囊胚75枚,优质囊胚33枚。CGH的检测结果为:胚胎培养液褪黑素处理组的非整倍体率(12.5%,2/16)略低于对照组(16.7%,1/6),但是两组间无统计学差异。结论:(1)IVM培养液中加入褪黑素的前提下,在胚胎培养液中加入褪黑素,对人类早期胚胎的发育作用不大,低浓度褪黑素(0、10-11、10-9M)有增加囊胚形成率的倾向,但是高浓度褪黑素(10-7M、10-5M)会不利于胚胎的发育。(2)褪黑素添加在胚胎培养液中,可移植优质囊胚的非整倍体率没有增加,在一定程度上表明褪黑素用于人类胚胎培养是可行的。