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研究背景:肺癌是最常见的恶性肿瘤。全世界所有恶性肿瘤中肺癌的发病率排第一位。据2010年中国肿瘤登记年报结果显示,肺癌居中国恶性肿瘤发病第一位。肺癌已成为危害人类健康的重要疾病,给社会和家庭带来了沉重的经济负担。所有肺癌病理分型中,非小细胞肺癌(NSCLC)占了大约85%,是肺癌的主要类型。虽然早期NSCLC可通过手术得到根治,但由于肺癌早期症状不明显,许多病人在确诊时已失去手术时机。一些晚期患者虽然可以通过化疗、放疗和分子靶向治疗等综合治疗改善症状、延长生命,但由于肿瘤发生发展机制的错综复杂,难以在限制毒副作用的同时最大化治疗效果,绝大部分患者依然无法摆脱死亡的命运。这就促使我们继续深入探讨NSCLC发生发展的分子调控机制,发现更多可以帮助临床诊疗的分子标记物和药物靶点。Stathmin 1(STMN1)是近年研究较多的一种微管解聚磷蛋白,通过调节微管动力,其在细胞分裂和增殖中具有关键调控作用。而除了参与有丝分裂和细胞周期进展,研究表明,STMN1还可在多种人类肿瘤如胃癌、鼻咽癌、结肠直肠癌、子宫内膜癌等多种肿瘤组织中存在差异表达,其差异表达常与术后癌症患者的生存率关系密切。这些研究提示:STMN1是一个与肿瘤进展相关的重要因子。既往研究表明该分子与肺腺癌的不良分化高度相关,但目前尚未见其在非小细胞肺癌(NSCLC)中的表达,与患者临床病理参数、预后和NSCLC细胞的恶性表型之间的相关性的报道。本课题拟通过检测非小细胞肺癌患者组织中STMN1表达,分析其表达与患者临床病理参数及预后相关性,并通过体外细胞功能学实验,初步阐明STMN1在肺癌中的生物学功能。实验共分为二部分:第一部分,收集NSCLC患者新鲜癌组织及癌旁组织及石蜡标本,在临床样本中检测STMN1的m RNA和蛋白表达,分析其与NSCLC患者临床病理参数及预后的相关性及其临床应用价值;第二部分,运用特异si RNA和基因转染技术,调节不同NSCLC细胞的STMN1水平,在体外水平检测STMN1对NSCLC增殖和转移能力的影响,初步明确STMN1在NSCLC发生发展中的作用。第一部分:STMN1在非小细胞肺癌中表达及临床意义研究目的:在NSCLC临床样本中检测STMN1在癌组织及癌旁组织中的表达,分析其表达与NSCLC患者临床病理参数及预后的相关性。方法:收集冻存NSCLC组织及其配对正常组织抽提RNA。用荧光定量PCR(Real-time PCR)和Western blot技术检测STMN1的表达。同时收集患者组织蜡块,制备组织芯片,用免疫组织化学技术检测STMN1蛋白的表达。应用相关统计学方法(卡方检验分析,Pearson相关性分析,Kaplan-Meier生存分析,Cox回归分析等),分析STMN1与患者临床病理参数及预后的相关性。结果:(1)STMN1 m RNA和蛋白在NSCLC肿瘤组织中显著高于相应的癌旁正常组织。(2)免疫组化结果提示STMN1蛋白在NSCLC中高表达,主要富集于细胞胞浆内。STMN1蛋白表达与NSCLC的分化程度,肿瘤大小,淋巴结转移和TNM分期显著相关。(3)Kaplan-Meier分析结果表明NSCLC患者STMN1高表达组术后总生存率显著低于低表达组。此外,多变量回归分析结果表明,STMN1蛋白是NSCLC预后的独立危险因素。结论:STMN1在NSCLC组织中显著高表达。STMN1蛋白表达与NSCLC的分化程度,肿瘤大小,淋巴结转移、TNM分期及患者术后总生存率显著相关。STMN1蛋白是NSCLC预后的独立危险因素。第二部分:STMN1在非小细胞肺癌中的功能研究目的:分析敲减STMN1对NSCLC生长增殖及侵袭转移的影响。方法:(1)购买针对STMN1的特异性si RNA,通过Dharma FECT 1转染NSCLC细胞,检测STMNl-si RNA对STMN1表达的影响采用实时荧光定量PCR(Real-time PCR)和Western blot法。(2)沉默STMN1表达NSCLC对细胞增殖和侵袭转移能力的影响分别运用CCK-8法、Transwell法来检测。结果:(1)Real-time PCR和Western blot显示,转染STMNl-si RNA可成功沉默NSCLC细胞系中STMN1表达。(2)沉默NSCLC细胞内STMN1表达可显著抑制细胞增殖和侵袭能力。结论:STMN1可能是NSCLC增殖迁移相关的重要调控因子。